北京大学学报(医学版) ›› 2015, Vol. 47 ›› Issue (5): 754-760. doi: 10.3969/j.issn.1671-167X.2015.05.005
葛晓东,李妹玲,文曦琳,李易,邓小林,吴晓凤,文明△,李少林
GE Xiao-dong, LI Mei-ling, WEN Xi-lin, LI Yi, DENG Xiao-lin, WU Xiao-feng, WEN Ming△, LI Shao-lin
摘要:
目的:采用不同质量浓度的超顺磁性氧化铁短发夹RNA(superparamagnetic iron oxide-short hairpin RNA,SPIO-ShRNA)分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞,观察细胞形态,检测细胞的生物学行为,寻找最佳的转染浓度。方法:将铁浓度分别为5、15、30、45、75、100 mg/L的探针转染SKOV3细胞后,采用荧光倒置显微镜观察探针进入细胞情况,普鲁士蓝染色及透射电镜观察细胞形态及细胞内铁颗粒,原子吸收光谱仪法测定细胞内铁含量,cell counting kit8(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白的表达,磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测细胞内信号强度变化。结果:在5~30 mg/L铁浓度范围内,细胞摄取量随探针铁质量浓度增加而增大,当探针铁浓度为45 mg/L时,进入细胞达到饱和,标记率接近100%;细胞活性随探针质量浓度的增加而降低,各实验组细胞活性分别为94.626%±1.050%、93.373%±1.180%、91.700%±3.122%、75.100%±4.362%、72.983%±3.233%、71.010%±2.910%,5、15、30 mg/L组细胞活性未见明显下降,差异无统计学意义(P=0.475,P=0.226,P=0.068);≥45 mg/L细胞活性明显下降(P<0.001); 探针浓度≥45 mg/L时,探针对SKOV3细胞EGFR蛋白表达抑制率明显增加,45 mg/L组蛋白表达率为68.905%±3.510%,与5、15、30 mg/L组相比差异具有统计学意义(P<0.001,P=0.001,P=0.003,P均<0. 01);MRI显示随着探针质量浓度增加,细胞信号强度逐渐降低,45 mg/L组细胞信号强度为165.55±4.92, 信号强度明显降低,45 mg/L组与空白组(相同体积的磷酸盐缓冲液)、正常细胞组(未标记的卵巢癌SKOV3细胞)、5、15、30 mg/L各组信号强度相比,差异均有统计学意义(P均<0.001)。结论:当SPIOShRNA分子探针铁浓度为45 mg/L时,可有效转染并特异性抑制卵巢癌SKOV3细胞的表达,能被MRI所检测,初步证实具有诊断与治疗的双重作用。
中图分类号:
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