北京大学学报(医学版) ›› 2016, Vol. 48 ›› Issue (6): 987-993. doi: 10.3969/j.issn.1671-167X.2016.06.012
李琼1,常志芳1,杨国安2,庞春艳1,2,王永福1,2△
LI Qiong1, CHANG Zhi-fang1, YANG Guo-an2, PANG Chun-yan1,2, WANG Yong-fu1,2△
摘要:
目的:构建靶向1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor-1, S1P1)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)慢病毒表达载体,感染干燥综合征细胞模型——人涎腺导管上皮细胞(human salivary gland cells,HSG),探讨S1P1的siRNA治疗干燥综合征的可能性,为临床靶标治疗提供广阔的思路。方法:实验分空白组、空载体组、scramble-siRNA组及S1P1-siRNA组,分别将pLL3.7空载体、构建成功的scramble-siRNA及S1P1-siRNA慢病毒表达载体与pMD2.G、pMDL g/p RRE、pRSV-REV共转染293T细胞制备病毒,感染HSG细胞株48 h,流式细胞术检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR法检测HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平,细胞免疫组织化学法检测细胞中S1P1蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞上清中γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平。结果:(1)成功构建scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表达载体,慢病毒的滴度约为3.5×108 TU/mL。(2)感染48 h后S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1 mRNA的表达水平明显低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1蛋白的表达水平低于空白组、空载体组和scramble-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)S1P1siRNA组HSG细胞分泌的IL-17的浓度明显降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(5)S1P1-siRNA组细胞上清液中IFN-γ的浓度降低,与空白组、空载体组和scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了靶向S1P1基因的慢病毒载体,S1P1 siRNA可以使S1P1 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞上清液中IL-17和IFN-γ的浓度下降,证明S1P1 siRNA可转染HSG细胞且特异、高效地抑制S1P1基因的表达,抑制细胞上清液中细胞因子的表达,为治疗干燥综合征奠定了实验基础。
中图分类号:
[1] | 田佳宜,张霞,程功,刘庆红,王世阳,何菁. 系统性红斑狼疮患者血清白细胞介素-2受体α水平及其临床意义[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(6): 1083-1087. |
[2] | 娄雪,廖莉,李兴珺,王楠,刘爽,崔若玫,徐健. 类风湿关节炎患者外周血TWEAK基因启动子区甲基化状态及其表达[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(6): 1020-1025. |
[3] | 廖栩鹤,王荣福,刘萌,陈雪祺,熊焰,农琳,殷雷,张炳晔,杜毓菁. 18F-FDG PET/CT半定量参数、表皮生长因子受体和间变淋巴瘤激酶基因突变对肺腺癌患者预后评估的价值[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(2): 246-254. |
[4] | 于焕斌,伍文杰,吕晓鸣,石妍,郑磊,张建国. 125I粒子近距离治疗外放疗后复发唾液腺癌[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(5): 919-923. |
[5] | 王晓,贺丹,李文婷,阿迪拉·斯依提,韩蕊,董颖. 144例维吾尔族与汉族女性子宫内膜癌微小RNA表达特点及临床意义[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(3): 570-577. |
[6] | 宋国红,李惠平,邸立军,严颖,姜晗昉,徐玲,万冬桂,李瑛,王墨培,肖宇,张如艳,冉然,王环. 真实世界吡咯替尼治疗HER2阳性转移性乳腺癌的疗效及安全性[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(2): 254-260. |
[7] | 宁晓然,王子乔,张珊珊,张霞,唐素玫,刘燕鹰. 超声评分系统在IgG4相关涎腺炎评估中的应用[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(6): 1032-1035. |
[8] | 张晓鹏,张维宇,霍飞,胡浩,王起,许克新. 原发性女性膀胱出口梗阻的手术疗效随访及其发病机制[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(6): 1052-1055. |
[9] | 梁学军,宫丽颖,周菲,周德敏,祝静静. 非天然氨基酸定点偶联抗人类表皮生长因子受体2-抗体偶联药物的药理学活性[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(5): 797-804. |
[10] | 王婷婷,韩影,高芳芳,叶磊,张育军. 环状RNA circ-SOD2对肠上皮屏障和溃疡性结肠炎的作用[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(5): 805-812. |
[11] | 姚心韵,高晓敏,邹晓英,岳林. 胞内转运对根尖牙乳头干细胞表面CXC趋化因子受体4表达的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(5): 893-899. |
[12] | 杨飞龙,洪锴,赵国江,刘承,宋一萌,马潞林. 基于长链非编码RNA的生物信息学分析构建膀胱癌预后模型并确定预后生物标志物[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(4): 615-622. |
[13] | 丛馨,闵赛南,吴立玲,蔡志刚,俞光岩. 激活毒蕈碱乙酰胆碱受体调控下颌下腺分泌的机制研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(3): 390-396. |
[14] | 张婧,陈洁,关贵文,张婷,鲁凤民,陈香梅. 肝细胞癌中趋化因子CXCL10及其受体CXCR3的表达及临床意义分析[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(3): 402-408. |
[15] | 任茜,周建,王鸣刚,陈克明. 脉冲电磁场促进成骨细胞成熟分化依赖于初级纤毛-PI3K/AKT途径[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(2): 245-251. |
|