鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定

北京大学学报（医学版） ›› 2008, Vol. 40 ›› Issue (3): 236-240.

鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定

许兰俊,张婷,邵陆宁,宋泉声,韩文玲,陈英玉

(北京大学1.基础医学院免疫学系,2.人类疾病基因研究中心,北京 100083)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-06-18 发布日期:2008-06-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-06-18 Published:2008-06-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7_163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM7_19-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.

关键词: 趋化因子类, CMTM7, 抗体, 单克隆, 肽类, 杂交瘤

许兰俊, 张婷, 邵陆宁, 宋泉声, 韩文玲, 陈英玉. 鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定[J]. 北京大学学报（医学版）, 2008, 40(3): 236-240.

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