KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位

北京大学学报（医学版） ›› 2009, Vol. 41 ›› Issue (6): 613-619.

• 论著 • 下一篇

KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位

郑宗方1,2, 韩巍3, 何其华4, 柯杨1,2,3,杜晓娟2,3△

(1.北京大学临床肿瘤学院，北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所遗传室，恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京 100142； 2. 北京大学肿瘤研究中心； 3. 北京大学基础医学院细胞生物学系； 4.北京大学医药卫生分析中心)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-18 发布日期:2009-12-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-18 Published:2009-12-18

摘要/Abstract

摘要：

目的：制备抗KIAA0649多克隆抗体并鉴定抗体的特异性，同时初步鉴定KIAA0649蛋白在细胞内的定位及其功能结构域。方法：通过TMHMM和DNAstar等软件对KIAA0649的蛋白质序列进行分析，选取了3段序列合成多肽，将3段多肽混合后对新西兰兔进行免疫，通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno-sorbnent assay, ELISA)测定血清中抗多肽的滴度，当抗血清的滴度达到1∶10⁵（体积比）时取血清，通过免疫亲和层析柱对抗体进行纯化。在U2OS细胞中表达Flag-KIAA0649或通过小干扰RNA沉默内源的KIAA0649，提取细胞蛋白，电泳后转膜，通过Western blot分析上述制备的多克隆抗体的特异性；将表达Flag-KIAA0649的细胞在玻片上固定，用抗Flag抗体和抗KIAA0649抗体进行双色免疫荧光分析，通过免疫荧光对KIAA0649抗体进行鉴定。利用PCR克隆构建Flag-KIAA0649全长表达质粒和系列Flag-KIAA0649缺失突变体，转染细胞后通过免疫荧光对KIAA0649在细胞内的定位进行研究。结果：得到的纯化KIAA0649多克隆抗体特异性地识别内源及外源KIAA0649蛋白，可用于免疫荧光和Western blot分析；全长KIAA0649蛋白在细胞核内显示特定的分布方式；KIAA0649的缺失突变体中，含有PENF motif 的突变体与全长KIAA0649蛋白在细胞核内的分布形式一致，推测该结构域可能为KIAA0649 的功能结构域。结论：通过上述方法制备的KIAA0649 多克隆抗体具有较高的特异性，可应用于KIAA0649的功能研究，KIAA0649在细胞内定位的研究对于阐明KIAA0649的功能机制具有重要意义。

郑宗方, 韩巍, 何其华, 柯杨, , 杜晓娟, . KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(6): 613-619.

参考文献

相关文章 15

[1]	刘静维, 卢戌, 杨照敏, 邓丽娟, 杨林. 负载NY-ESO-1多肽的树突状细胞激发特异性细胞毒性T淋巴细胞反应[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(5): 840-846.
[2]	许丹，林峰，朱小语，刘文颖，陈晓文，冯金秋，范爱琴，蔡木易，许雅君. 牡蛎肽对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2016, 48(3): 392-397.
[3]	赵卫, 高辉, 朱佳鑫, 张学武, 栗占国. 血清Dickkopf-1与原发性痛风性关节炎骨破坏的相关性[J]. 北京大学学报（医学版）, 2012, 44(2): 254-258.
[4]	张春丽, 王荣福, 张丽, 郭凤琴, 李玲, 康磊, 闫平, 杨铭. 靶向整合素α_vβ₃受体的新型RGD肽二聚体的¹³¹I标记与生物活性的初步评价[J]. 北京大学学报（医学版）, 2011, 43(2): 295-300.
[5]	刘洋, 张晨光, 周春燕 . 经典Wnt/β-catenin信号通路中的双向调控[J]. 北京大学学报（医学版）, 2010, 42(2): 238-242.
[6]	田清平, 冯雪茹, 庞永正, 唐朝枢, 刘梅林. 血浆皮质醇激素抑制素水平与冠心病的关系[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(5): 537-540.
[7]	万有, , 韩济生, John E. Pintar. 孤啡肽基因敲除小鼠电针镇痛作用增强[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(3): 376-379.
[8]	徐莉, 孟焕新, 张立, 陈智滨, 冯向辉, 释栋. 侵袭性牙周炎患者血清中抗牙龈卟啉单胞菌的IgG抗体水平的研究[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(1): 52-55.
[9]	许兰俊, 张婷, 邵陆宁, 宋泉声, 韩文玲, 陈英玉. 鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定[J]. 北京大学学报（医学版）, 2008, 40(3): 236-240.
[10]	曹琦珍, 林树钱, 王赛贞, 林志彬. 灵芝多糖肽对人肺癌细胞侵袭的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(6): 653-656.
[11]	王磊, 白薇, 冯海兰, 贾欣茹. 自组装寡肽在体外模拟牙釉柱晶体形成[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(1): 46-49.
[12]	王念鸿, 郭晓蕙, 王薇. 降糖及调脂治疗对OLETF大鼠血浆和胃组织中ghrelin水平的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2006, 38(6): 603-608.
[13]	王怡瑞, 肖军军, 董晓敏, 孟书聪, 邓声菊, 况斌, 严俊, 赵芳, 曾慧慧. 新型有机硒化合物双硒唑烷-1的动物体内免疫调节作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2006, 38(6): 634-639.
[14]	王昱, 郭晓蕙. 胰升糖素样多肽-1对OLETF大鼠胰腺的保护作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2006, 38(4): 375-380.
[15]	张玉芳, 王海宁, 洪天配. ghrelin在甲状腺疾病组织中的表达[J]. 北京大学学报（医学版）, 2006, 38(2): 193-196.

Metrics

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed

KIAA0649多克隆抗体的制备及其细胞内定位

PDF (PC)

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

Metrics

本文评价

推荐阅读 0