摘要: 目的:探讨一定浓度的重组人肿瘤坏死因子α(recombinant human tumor necrosis factor alpha, rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells, hASCs)体外成骨向分化的影响。方法:采用第4代hASCs,根据培养基的不同分为4组:(1)基础培养[DMEM + 10% FBS(体积分数)+ 100 U/mL 青霉素 + 100 mg/L 链霉素];(2)基础培养+10 μg/L rhTNF-α;(3)成骨向诱导培养(基础培养+100 nmol/L 地塞米松+50 μmol/L维生素C+10 mmol/L β-甘油磷酸);(4)成骨向诱导培养+ 10 μg/L rhTNF-α。各组每3天更换相应培养基。在第3、7、14天和第21天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量检测;在第14和21天进行钙结节染色和矿化沉积定量检测;并用反转录PCR检测成骨向诱导组核心结合因子α1(core-binding factor α1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨钙素(osteocalcin, OC)等成骨相关基因的表达;在成骨向诱导的第3天,用实时定量PCR检测rhTNF-α对hASCs成骨相关基因表达的影响。结果:对碱性磷酸酶定量检测,在成骨向诱导的第14天(3.527 ± 0.415 vs. 2.345 ± 0.354,P<0.01)和第21天(3.106 ± 0.105 vs. 2.442 ± 0.163,P<0.01),10 μg/L的rhTNF-α可以促进其表达;同样对于矿化沉积检测,在成骨向诱导的第14天(2.896 ± 0.173 vs. 0.679 ± 0.173,P<0.01)和第21天(2.231 ± 0.233 vs. 1.729 ± 0.229, P<0.01),10 μg/L的rhTNF-α也促进其表达;反转录PCR和实时定量PCR也表明rhTNF-α可以促进 Cbfa1,Osx和OC的表达。结论:10 μg/L 的rhTNF-α可以促进成骨向诱导的hASCs体外成骨向分化,并可以促进成骨相关基因Cbfa1、Osx和OC的表达。
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