尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用

北京大学学报（医学版） ›› 2007, Vol. 39 ›› Issue (4): 426-428.

尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用

杜绍财,张瑞,李俊强,魏来

(1.北京大学人民医院,北京大学肝病研究所,北京 100044;2.卫生部临床检验中心)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-08-18 发布日期:2007-08-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-08-18 Published:2007-08-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),并优化尿苷酶(Uracil-DNA glycosylase,UDG)的抗污染剂量和抗污染时间.方法:逆转录-抗污染-联体PCR技术的第1次PCR实行逆转录-抗污染-PCR同步化;第2次PCR经分层蜡处理进行全程抗污染,并应用该技术扩增HCV cDNA,制备全含脱氧尿嘧啶核苷酸(dUTP)的DNA(dU-DNA)为模板,作为UDG实验室抗污染质控对照并验证该联体PCR检测HCV RNA灵敏度,用DNA-酶免疫测定技术检测HCV cDNA.结果:抗污染实验结果证实,0.2 u 的UDG 在37 ℃和42 ℃ 40 min均可达到抗污染的效果.对高浓度全dU-DNA模板也有良好的抗污染效果.灵敏度检验结果表明,用HCV RNA浓度为 2.110×10⁵copies /mL的血清,稀释到10-4倍后仍可检测出HCV RNA.结论:应用该逆转录-抗污染-联体PCR技术进行全程抗污染,减少了因程序中多次加样造成的污染,为HCV逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测RNA提供良好的防污染和抗污染操作技术.

杜绍财, 张瑞, 李俊强, 魏来. 尿苷酶在丙型肝炎病毒逆转录-抗污染-联体聚合酶链反应中的应用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(4): 426-428.

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