GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用

北京大学学报（医学版） ›› 2001, Vol. 33 ›› Issue (1): 62-65.

GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用

张骏,王新娟,张蕾,许进力,王笑健,蔺新力

^A北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系,^B北京大学^C1447^D1%^A美国俄克拉荷马医学基金会^B美国俄克拉荷马医学基金会^C271030^D2

出版日期:2001-02-28 发布日期:2001-02-28

Online:2001-02-28 Published:2001-02-28

摘要/Abstract

摘要： 目的:将单纯疱疹病毒胸苷激酶和粒细胞-单核细胞集落刺激因子融合基因(Lxpsp-hGM-CSF-Hytk)转导人恶性神经母细胞瘤株SH-SY5Y,观察外源融合基因的表达及其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:FuGENE6介导将含融合基因的逆转录病毒表达载体和仅含潮霉素磷酸转移酶基因的对照载体分别转染逆转录病毒包装细胞系PA317.以适量病毒上清转导SH-SY5Y,RT-PCR方法检测融合基因的存在;细胞因子依赖株TF-1的生长状况及丙氧鸟苷(GCV)杀伤实验鉴定融合基因的表达.结果:将重组病毒产生细胞PA317-GM-CSF-Hytk和PA317-Hy的病毒上清2ml分别转导SH-SY5Y,60 mg·L-1的潮霉素进行筛选,得到了稳定传代的阳性细胞集落SY5Y-GMHytk,SY5Y-Hy.RT-PCR检测阳性细胞集落中有外源的GM-CSF存在.用阳性细胞集落上清培养TF-1细胞,细胞成活.SY5Y,SY5Y-GMHytk,SY5Y-Hy 3种细胞的生长曲线无明显差别,但用不同浓度GCV分别作用于此3种细胞显示:0.03～300 mg·L-1的GCV对SY5Y-GMHytk有明显的杀伤作用(IC50=3 mg·L-1),而对另外两种细胞几乎无毒性作用(IC50＞300 mg·L-1).30 mg·L-1GCV作用96 h后可杀死80%以上的SY5Y-GMHytk细胞.结论:应用逆转录病毒介导,将融合基因GMCSF-tk成功地导入了SH-SY5Y肿瘤细胞株,并观察到外源融合基因的表达及HSV-tk/GCV体系对肿瘤细胞的杀伤作用.

关键词: 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子, 胸苷激酶, 基因转移, 神经母细胞瘤, 肿瘤细胞, 培养的/药物作用

张骏, 王新娟, 张蕾, 许进力, 王笑健, 蔺新力. GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2001, 33(1): 62-65.

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