北京大学学报(医学版) ›› 2015, Vol. 47 ›› Issue (5): 737-742. doi: 10.3969/j.issn.1671-167X.2015.05.002
贾双双,李伟阳,刘欣,李丽英△
JIA Shuang-shuang, LI Wei-yang, LIU Xin, LI Li-ying△
摘要:
目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向肌成纤维细胞分化的机制。方法:采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSCs,将对数生长期的P3~P5代BMSCs作为实验细胞,使用不同浓度的TGF-β1诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,并在此基础上观察加入自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对其分化的影响。采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测BMSCs分化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ 型胶原[collagen α1(Ⅰ),Col α1(Ⅰ)]和Ⅲ 型胶原[collagen α1(Ⅲ), Col α1(Ⅲ)]的表达情况。使用2’,7’-dichlorohydrofluorescein diacetate(DCFH-DA)预孵育BMSCs 15 min,然后加入TGF-β1处理不同时间,检测TGF-β1刺激下BMSCs中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生,并使用高内涵方法对BMSCs中产生的ROS进行统计分析。结果:TGF-β1可以剂量依赖地诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,上调α-SMA、Col α1(Ⅰ)和Col α1(Ⅲ)的表达。TGF-β1诱导BMSCs分化的作用可以被NAC阻断。TGF-β1在BMSCs中能够引起ROS的产生,且该过程迅速而短暂,当TGF-β1作用30 min时,其在BMSCs中诱发的ROS达到峰值。结论:TGF-β1通过产生ROS介导BMSCs向肌成纤维细胞分化。
中图分类号:
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