人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

北京大学学报（医学版） ›› 2001, Vol. 33 ›› Issue (2): 167-169.

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

狄春辉,施群,张颖妹,赵辰,钟英成,黄大无,马大龙

^A北京大学基础医学院免疫学系，北京 100083^B北京大学^C1447

出版日期:2001-04-28 发布日期:2001-04-28

Online:2001-04-28 Published:2001-04-28

摘要/Abstract

摘要： 目的：为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法：利用RT-PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ) cDNA，并克隆到大肠杆菌表达载体中，在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin Ⅴ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化，可除去MS2细菌蛋白，再经离子交换层析纯化，可得成熟的Annexin Ⅴ纯品,FITC标记后的Annexin Ⅴ可用于细胞凋亡的检测。结果：在大肠杆菌表达的人重组Annexin Ⅴ占菌体蛋白的56 %，经纯化获得99 %纯度的非融合型Annexin Ⅴ， FITC标记的Annexin Ⅴ能有效地检测凋亡细胞。结论：成功地建立了批量获取Annexin Ⅴ的技术路线，为推广高效检测凋亡技术提供了基础。

狄春辉, 施群, 张颖妹, 赵辰, 钟英成, 黄大无, 马大龙. 人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测[J]. 北京大学学报（医学版）, 2001, 33(2): 167-169.

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