重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性

北京大学学报（医学版） ›› 2002, Vol. 34 ›› Issue (6): 684-687.

重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性

曾令娥,黄晶,白惠卿,范慧,黄大无,王露

^A北京医学高等专科学校,北京,101300^B北京医学高等专科学校^C1981^D1%^A北京大学基础医学院免疫学系^B北京大学^C1447^D2

出版日期:2002-12-28 发布日期:2002-12-28

Online:2002-12-28 Published:2002-12-28

摘要/Abstract

摘要： 目的:提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性.方法:利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区(HSA-D3)的融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.分别对Klenow酶和Klenow-HSA融合蛋白进行纯化,并进行活性及稳定性的研究.结果:发现Klenow-HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达.体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性,其稳定性明显提高.结论:融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性,为研制新一代高稳定性Klenow酶提供了基础.

关键词: DNA聚合酶 Ⅰ/生物合成, 人血清白蛋白, 重组融合蛋白质类/生物合成, DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段

曾令娥, 黄晶, 白惠卿, 范慧, 黄大无, 王露. 重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性[J]. 北京大学学报（医学版）, 2002, 34(6): 684-687.

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