目的:评价全脊椎切除术治疗脊柱转移癌的价值.方法:对1995年12月～1998年4月4例5次全脊椎切除术的临床表现、影像资料、手术综合治疗、随访等全面分析、总结.结果:1例术后5.5年无瘤生存,1例术后6.5年局部复发、再次手术、观察中;2例分别于术后2年1个月和1.5年死亡.结论:若适应证选择恰当,此手术疗效肯定、值得推广.

目的:探讨寰枢椎肿瘤手术显露与根治性切除的可能性和方法, 以及枕颈内固定技术.方法:对19例经手术治疗的寰枢椎肿瘤病例进行回顾性分析.结果:19例中16例获平均32个月完整随访,其中12例未见肿瘤复发,1例术后死于呼吸道痰液梗阻,1例肿瘤复发放弃治疗,2例肿瘤复发后再次手术.17例伴有神经功能障碍者,Frankel分级平均提高1.6级.结论:寰枢椎肿瘤尽管治疗困难,但经合理的手术显露与根治性切除,仍可能获得良好疗效.

目的:总结36例脊柱骨巨细胞瘤临床诊断和治疗的经验.方法:36例脊柱骨巨细胞瘤,男性19例,女性17例,年龄12～67岁.颈椎16例,胸椎6例,腰椎5例,颈胸段、胸腰段和骶骨各3例.1990年前的10例中3例颈椎骨巨细胞瘤单独应用放射治疗,余7例用外科手术切除加放射治疗.1991年以后,23例有CT和MRI扫描,故用Enneking外科分期,并结合Weinstein-Boriani-Biagni外科分期进行分类,SⅡ期6例和SⅢ期3例沿肿瘤假囊行椎体切除与脊柱内固定治疗,13例SⅢ期病例用全椎切除与脊柱内固定治疗.结果:单独应用放射治疗的3例颈椎骨巨细胞瘤和应用手术加放射治疗的7例随访7～30年,无肿瘤局部复发.椎体切除的9例与全椎切除的13例,随访2～8年,有3例因切除不彻底复发,其余19例到目前无局部复发.结论:完全切除病损是控制脊柱骨巨细胞局部复发的有效措施.放射治疗是有益的辅助治疗方法.

目的:探讨脊柱肿瘤术前采用CT监测下经皮穿刺活检获得病理诊断的方法,评价其在脊柱肿瘤诊疗中的作用.方法:对脊柱破坏初诊为脊柱肿瘤的患者采用CT监测下经皮穿刺活检的方法获得病理诊断,并与其他的诊断方法相比较,结合影像学资料和临床制定综合的治疗方案.结果:292例初诊为脊柱肿瘤的患者包括颈椎136例(寰枢椎34例)、胸椎76例、腰椎68例、骶椎12例,经穿刺诊为结核43例,转移瘤93例,脊柱原发恶性肿瘤59例,脊柱良性肿瘤48例,肿瘤样病变16例,化脓性感染8例,骨质疏松病理骨折后骨修复改变8例,Paget病3例,其他14例.活检阳性率95.21%,手术114例,手术后病理证实活检符合率95.61%.平均随访37.7个月,活检的准确率为92.81%(271/292).无并发症发生.结论: CT监测下经皮穿刺活检是脊柱肿瘤术前明确诊断的最有效方法,安全、准确率高、费用低,对制定脊柱肿瘤的综合治疗方案起重要的作用.

目的: 通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.方法: 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒(1×109～5×109 pfu*ml-1).通过RT-PCR检测CTLA4Ig的体内表达,观察记录心脏移植物的存活时间,通过MLR、IL-2逆转实验,Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:用LacZ腺病毒载体(AdLacZ)治疗组,不能延长移植物的存活,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组,DA大鼠的心脏移植物明显延长.RT-PCR实验证明,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.Th1和Th2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性,IL-2逆转实验表明,该耐受与克隆失活有关.结论: 在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受,延长心脏移植物存活,该移植耐受表现为供体特异性,其形成与克隆失活有关,未发现Th1/Th2型细胞因子的偏移现象.

目的:探讨由于幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)和人胃黏膜上皮表达相同的Lewis抗原,在宿主抗H.pylori的免疫应答中,发生自身免疫反应的可能性.方法:采用流式细胞术和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放试验,在检测3种胃癌细胞系Lewis血型抗原表达状况的基础上,进行体外抗原抗体结合诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应实验.结果:KATOⅢ、803和823细胞系均有Lewis抗原的表达,但各自的表型和量不同.在体外诱发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性效应中,除803细胞系anti-H.pylori和anti-Leb组外,其余3种细胞系各种抗体组均有不同水平的LDH的释放.结论:初步提示Lewis抗原抗体结合诱发自身免疫反应存在的可能性,但其机制还有待进一步研究.

目的:通过检测胃癌及其癌前病变中端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)蛋白的表达,探讨其作为胃癌标志物在评价胃癌癌前病变中的价值.方法:采用抗人hTERT单克隆抗体,以免疫组化法检测21例胃良性病变(慢性浅表性胃炎)、98例胃癌前病变(中重度肠上皮化生74例、中重度异型增生24例)、73例胃癌(早期胃癌20例、进展期胃癌53例)标本hTERT的表达.结果:胃癌组和癌前病变组hTERT阳性率分别为84.93%和11.22%,浅表性胃炎组无一例hTERT阳性.胃癌组hTERT阳性率明显高于癌前病变组(χ2=92.900,P=0.000),而癌前病变组与浅表性胃炎组的阳性率在统计学上差异无显著性(χ2校正=1.432,P=0.232).在胃癌组中,进展期胃癌hTERT阳性率略高于早期胃癌,但统计学上差异无显著性(χ2校正=0.127,P=0.721);但其阳性强度比较差异有显著性(χ2=14.541,P=0.002).33例癌旁肠上皮化生组织的hTERT阳性率为51.52%,明显高于非癌肠上皮化生组的10.81%(χ2=21.118,P=0.000).结论:免疫组化检测hTERT高表达可以作为胃癌标志物,追踪hTERT阳性的胃癌癌前病变患者可能有助于早期发现胃癌.

目的:研究成人慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia ,CML)骨髓细胞凋亡促进分子--TFAR19的表达,以探讨TFAR19在CML发病及疾病进展中的作用.方法:利用15种不同荧光标记的单克隆抗体标记骨髓细胞,通过流式细胞术检测未治CML慢性期病人、CML加速/急变期病人、及正常人骨髓不同细胞群细胞内TFAR19的表达.结果:20例未治CML慢性期及13例加速/急变期病人骨髓总的有核细胞内TFAR19平均荧光强度明显低于10例正常人组骨髓总的有核细胞,分别为5 793±1 536,7 260±781,P＜0.01及4 293±1 082,7 260±781,P＜0.01,其中未治CML慢性期及加速/急变期病人骨髓粒细胞内TFAR19平均荧光强度低于正常人组骨髓粒细胞,分别为6 240±1 734,8 317±726,P＜0.01,及5 759±1 487,8 317±726,P＜0.01;未治CML慢性期及加速/急变期病人骨髓淋巴细胞内TFAR19平均荧光强度低于正常人组骨髓淋巴细胞,分别为1 292±639,2 271±820,P＜0.01,及1 231±281,2 271±820,P＜0.01.CML加速/急变期病人总的有核细胞与未治CML慢性期病人相比,TFAR19表达进一步降低,分别为4 293±1 082,5 793±1 536,P＜0.01.结论:未治CML慢性期病人、CML加速/急变期病人骨髓总的有核细胞与正常人相比TFAR19表达降低,未治CML慢性期病人、加速/急变期病人骨髓粒细胞及淋巴细胞TFAR19表达均低于正常人组骨髓,CML加速/急变期病人总的有核细胞与未治CML慢性期病人相比,TFAR19表达进一步降低.TFAR19的异常表达可能在CML疾病进展中起一定作用.

目的: 研究反义hTERT基因对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响.方法: 构建反义hTERT基因的真核表达载体,采用LIPOFCTAMINETM Reagent转染卵巢癌细胞系SKOV3,通过RT-PCR、Trap-ELASA、生长曲线、裸鼠体内致瘤能力等方法比较转染前后细胞hTERT基因表达、端粒酶活性、细胞生长、致瘤性等方面的变化.结果:转化细胞系细胞hTERT基因的表达受到抑制,端粒酶活性下调,肿瘤细胞的增殖与生长速度明显降低,细胞的克隆形成能力及裸鼠体内的成瘤能力下降,肿瘤的恶性表型部分逆转.结论:应用反义技术下调hTERT基因表达可有效降低端粒酶活性并部分逆转卵巢癌细胞的恶性表型,hTERT基因可望成为卵巢癌基因治疗的新靶点.

目的:提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性.方法:利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区(HSA-D3)的融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.分别对Klenow酶和Klenow-HSA融合蛋白进行纯化,并进行活性及稳定性的研究.结果:发现Klenow-HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达.体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性,其稳定性明显提高.结论:融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性,为研制新一代高稳定性Klenow酶提供了基础.

目的:探讨caspase-3在1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium , MPP+)诱发多巴胺能神经元凋亡中的表达.方法:建立MPP+诱发中脑神经细胞凋亡模型,通过免疫组织化学染色及RT-PCR检测方法,检测原代培养的16 d胎鼠的中脑多巴胺能神经元中caspase-3的表达.结果:在正常组和细胞凋亡组(MPP+组)的caspase-3在蛋白质和基因水平均有表达,但在细胞凋亡组中表达强度明显高于正常对照组,二者差异具有显著性.caspase-3的蛋白酶抑制剂Ac-DEVD-CHO可降低caspase-3的表达.结论:caspase-3参与MPP+诱发的多巴胺能神经元的凋亡过程,并起关键作用,以MPP+为诱导剂建立的中脑神经细胞凋亡模型可用于研究与帕金森病(Parkinson disease, PD)有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物.

目的:构建人端粒酶逆转录酶组分(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)反义cDNA逆转录病毒载体,观察其对大肠癌细胞HT29端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用,探讨以hTERT为靶的大肠癌基因治疗的可行性.方法:RT-PCR扩增hTERT mRNA 5′起始端835 bp的cDNA,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体pLXSN质粒中,转染包装细胞PT67后获得重组病毒,病毒感染大肠癌HT29细胞.处理前后采用Western blot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况.结果:反义hTERT作用大肠癌HT29细胞后hTERT表达下降,端粒酶活性被抑制,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡.结论:反义hTERT对大肠癌细胞HT29端粒酶活性具有明显的抑制作用,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,hTERT有可能成为大肠癌基因治疗靶点.

目的:研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1) /一氧化碳(carbon monoxide,CO)体系与高热惊厥(febrile convulsion, FC)的关系.方法:采用热水浴诱导大鼠FC,隔日诱导惊厥1次,共诱导10次.发育期大鼠随机分为2组:37.0 ℃水浴正常对照组(n=12),高热处理(44.5 ℃热水浴)组(n=33),高热处理组又分出高热未惊厥组(FC=0,n=13)和FC组(FC≥6次,n=16).用组织原位杂交技术观察大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回HO-1 mRNA的变化,用分光光度计检测大鼠左侧颞叶皮层和海马组织匀浆及血浆中CO含量.结果: FC组海马CA1区、CA3区和齿状回HO-1 mRNA表达明显高于正常对照组及高热未惊厥组(P<0.01),FC组脑组织匀浆及血浆中CO含量亦明显高于正常对照组及高热未惊厥组(P<0.05,P<0.01).结论:热水浴诱导大鼠FC可导致HO-1 mRNA表达的增高,并使CO产生增多.

目的:探讨大鼠海马神经元血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在正常发育期的表达及在高热惊厥时的变化.方法:发育期大鼠随机分为2组:正常组(n=6)和高热处理组,根据大鼠是否惊厥,后者又分为高热未惊厥组(n=6)和高热惊厥组(n=6).利用热水浴模型诱导大鼠高热惊厥,选择不同鼠龄的发育期大鼠,利用免疫组织化学方法,观察大鼠海马神经元HO-1表达的变化.结果:(1)出生3 h的新生大鼠海马HO-1未见表达,生后1周表达水平较高,生后2周达高峰,3周表达降低,生后6周表达明显降低,成熟后(2月)表达维持在较低水平.(2)海马CA1、CA3和门区神经元HO-1表达光密度的比较:高热惊厥组HO-1表达增加,与正常组及高热未惊厥组比较,差异均有显著性(P＜0.01),高热未惊厥组与正常组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:不同鼠龄的发育期大鼠,海马神经元HO-1表达水平不同;发育期大鼠高热惊厥诱导海马神经元HO-1表达显著增加,这种表达增加可能与高热惊厥脑损伤有关.

目的:比较注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD);儿童3种亚型α波竞争图的特点.方法:应用脑电超慢涨落分析技术,分析处理ADHD 3种亚型及正常对照的脑电信号α波进行.结果: (1)ADHD混合型、注意缺陷为主型8 Hz全脑平均优势几率明显高于正常儿童(F = 5.68, P< 0.01); 冲动多动为主型11 Hz全脑平均优势几率明显高于混合型及注意缺陷为主型(F = 5.11, P < 0.01).(2)正常儿童、ADHD注意缺陷为主型主频均为10 Hz,次频为9 Hz;ADHD混合型、冲动多动为主型8、9、10 Hz差异均无显著性(P >0.05),无主次频之分,α波能量分布分散.(3)ADHD3 种亚型各脑区熵值均高于正常对照,在F3、F4、C4、P4、O2、F7、F8导联注意缺陷为主型熵值明显高于正常对照组;在F4、P4、O2导联混合型熵值明显高于对照组,差异均集中于右脑.结论:ADHD儿童混合型、注意缺陷为主型α波慢化,觉醒不足;冲动多动为主型快α波增多,觉醒过度;ADHD儿童3种亚型脑有序度均降低,注意缺陷为主型及混合型右脑功能失调较严重.

目的:探讨肾上腺髓质素 (adrenomedullin;ADM) 对培养成骨细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制. 方法:分离培养胎大鼠颅骨成骨细胞,经 ADM孵育,3H-胸腺嘧啶(3H-thymidine, 3 H-TdR)参入法测定DNA合成,放射免疫法测定细胞-环磷酸腺甙(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)含量,用底物蛋白磷酸法测定蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)活性.结果:随ADM浓度(10-12～10-8 mol*L-1)增加,成骨细胞3H-TdR参入呈线性增加(r=0.998,P<0.01).ADM使成骨细胞cAMP含量和PKA、PKC、MAPK活性增加(P<0.05或P<0.01).PKC和MAPK激酶抑制剂能阻断ADM刺激成骨细胞3H-TdR参入增加的作用,而PKA和P38MAPK抑制剂对此无影响.结论:ADM能够刺激成骨细胞增殖,激活PKC和MAPK/ERK(细胞外信号调节激酶extracellular signal-regulated kinase),是其主要的细胞内信号转导途径,PKA、P38MAPK途径可能与此无关.

目的:评价脉冲振荡肺功能(impulse oscillation,IOS)在肺间质纤维化诊断中的意义.方法:分析3组不同病因所致肺间质纤维化的病人常规和脉冲振荡肺功能诸指标间的关系以及两种肺功能检测方法对肺间质纤维化诊断的敏感性.结果:常规肺功能检查指标FVC 、FEV1 、TLC、RV/TLC、DLco结节病组与结缔组织病和间质性肺炎组间差异有显著性,IOS检查3组间各项指标无明显差异,常规肺功能 FVC 、TLC、DLco与IOS中的 X5呈正相关(r=0.56,P<0.001; r=0.62,P<0.001; r=0.46,P<0.05).FVC 、DLco与响应频率呈负相关(r=-0.43,P<0.01, r=-0.47,P<0.05).两种肺功能检测方法对间质纤维化的诊断的敏感性无显著性差异(P>0.05).结论:间质性肺疾病的肺功能改变与其肺受累的程度有关,而与导致纤维化的病因无关, 常规肺功能指标FVC 、DLCO,脉冲振荡肺功能指标X5以及响应频率对肺间质纤维化的诊断有一定的意义;两种方法对本病诊断的敏感性无差异.

目的:观察博来霉素致肺纤维化大鼠模型肺组织基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type metrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)及组织型金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2的表达,探讨其在肺损伤与修复过程的作用,进一步阐明肺间质纤维化的发病机制.方法:采用博来霉素致Wistar大鼠肺纤维化模型,RT-PCR法半定量测定大鼠肺组织MMP-2、MMP-9、MT1-MMP及TIMP-1mRNA的表达;免疫组化方法观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2在大鼠肺组织的表达.结果:MMP-2、MMP-9、MT1-MMP及TIMP-1 mRNA在正常肺组织中均有少量表达,分别为0.072±0.023,0.334±0.089,0.038±0.013及0.098±0.030;给予博来霉素后1周,MMP-2、MT1-MMP及TIMP-1 mRNA表达显著增加,分别为0.435±0.058,0.312±0.078和0.526±0.120(与对照组相比,P<0.05);至第4周时上述3种mRNA表达明显下降,但仍比正常对照组显著增高(0.126±0.050,0.064±0.022及0.179±0.031,与对照组及1周组相比,P<0.05);MMP-9 mRNA在给予博来霉素后1周表达明显增高(0.711±0.227,与对照组相比,P<0.05),持续至第4周为0.639±0.153,经统计学处理,与1周时差异无显著性(但与对照组相比,P<0.05).免疫组化染色正常肺组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2有少量染色阳性,博来霉素1周时染色增强,MMP-2、MMP-9、TIMP-1第4周时染色阳性细胞较1周时减少但仍明显高于正常肺组织.TIMP-2博来霉素1周时染色明显增强并保持到第4周.结论:MMP-2、MMP-9、MT1-MMP及其组织抑制物TIMP-1、TIMP-2的在肺纤维化形成中起重要调节作用.

目的:研究特发性间质性肺炎(idiopathic interstitial pneumonia, IIP)患者对糖皮质激素治疗的反应性.方法:回顾性分析31例糖皮质激素治疗的IIP患者,从临床表现、肺功能、影象学及病理学等方面分析IIP患者对糖皮质激素治疗的反应性.结果:(1)激素治疗有效组(A组)16例,激素治疗无效组(B组)15例,年龄分别为(55±6)岁和(63±10)岁(P<0.05),病程分别为(14.4±26.4)月和(67.2±105.1)月(P<0.05);(2)静息状态下呼吸困难分别有1例和4例,高热分别有1例和4例,肺内湿罗音A组较B组少;(3)PaO2分别为(74.2±15.5)和(58.8±20.7) mm Hg(P<0.01);(4)影象学表现为蜂窝肺者B组较多;(5)A组3例病理为非特异性间质性肺炎,2例为普通型间质性肺炎,1例为急性间质性肺炎,B组1例为急性间质性肺炎.结论:年轻、病程短、临床病情较轻、非蜂窝肺表现、病理分型NSIP者对激素反应好,在无病理诊断的情况下,应对IIP患者早期应用激素试验治疗.

目的:介绍一种制备T 载体的方法.方法:用限制性内切酶Xcm Ⅰ酶切,在两端产生T末端,制备的T载体可直接用来克隆用Taq DNA 聚合酶产生带A末端的PCR产物.结果:PCR产物直接和T载体连接,用常规氯化钙法制备的感受态菌转化,对转化子提取质粒进行酶切鉴定,证明阳性率达80%.结论:制备T载体过程简单,质量稳定,产量高,并可扩增等优点.

目的:研究抑制PCR产物中残留尿苷酶(uracil DNA glycosylase,UDG)活性的试剂.方法:采用DNA-EIA技术检测在全dU-DNA扩增物中含有稳定剂和不含稳定剂的样品,置室温24 h和37 ℃ 48 h的DNA杂交百分率.结果:(1)在PCR产物中加入稳定剂A液和B液置室温24 h,取5 μl直接杂交,其杂交百分率为61.470%和68.996%,对照组为99.283%.(2)在30 μl PCR产物中加入稳定剂后,并加1×PCR缓冲液稀释至70 μl,置37 ℃ 48 h取10 μl样品杂交,5 μl和2.5 μl A液组杂交百分率为71.092%和67.691%,对照组为68.020%和63.906%.5 μl和2.5 μl B液组杂交百分率为91.333%和80.307%,对照组为63.906%和68.020%.结论:B液可抑制PCR产物残留UDG活性,对保护全dU-PCR产物起重要作用.