摘要： 目的:构建人端粒酶逆转录酶组分(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)反义cDNA逆转录病毒载体,观察其对大肠癌细胞HT29端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用,探讨以hTERT为靶的大肠癌基因治疗的可行性.方法:RT-PCR扩增hTERT mRNA 5′起始端835 bp的cDNA,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体pLXSN质粒中,转染包装细胞PT67后获得重组病毒,病毒感染大肠癌HT29细胞.处理前后采用Western blot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况.结果:反义hTERT作用大肠癌HT29细胞后hTERT表达下降,端粒酶活性被抑制,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡.结论:反义hTERT对大肠癌细胞HT29端粒酶活性具有明显的抑制作用,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,hTERT有可能成为大肠癌基因治疗靶点.
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