抗人p185erbB2人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定

北京大学学报（医学版） ›› 2004, Vol. 36 ›› Issue (5): 491-495.

抗人p185^erbB2人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定

姜北海,刘文斌,孟麟,吴健,寿成超

(北京大学临床肿瘤学院,北京市肿瘤防治研究所,生化与分子生物学实验室,北京 100034)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-10-18 发布日期:2004-10-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-10-18 Published:2004-10-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:HER2/neu过度表达见于多种恶性肿瘤.作为肿瘤抗原,p185erbB2是一个理想的肿瘤治疗靶点.本实验在既往工作基础上,构建嵌合型抗p185erB2单克隆抗体(单抗)的真核表达载体,并在CHO-dhfr-细胞中表达,从而降低鼠源性抗体的免疫原性,为进一步的应用研究奠定基础.方法:RT-PCR扩增p185erbB2单抗1-2的轻、重链可变区基因,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中,脂质体转染CHO-dhfr-细胞.经RT-PCR、间接ELISA、Western blot检测人-鼠嵌合抗体的表达水平,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定.此外,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185erbB2的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用.结果:用RT-PCR、间接ELISA、Western blot方法证明人-鼠嵌合抗体在CHO-dhfr-细胞中表达;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185erbB2的细胞反应阳性,与低表达p185erbB2的细胞反应阴性;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185erbB2分子特异性结合;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185erbB2的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用.结论:CHO-dhfr-细胞表达的人-鼠嵌合抗体可与p185erbB2特异性结合,并可抑制高表达p185erbB2的肿瘤细胞生长,表明抗人p185erbB2人-鼠嵌合抗体具有肿瘤生物治疗的潜在应用价值.

姜北海, 刘文斌, 孟麟, 吴健, 寿成超. 抗人p185^erbB2人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定[J]. 北京大学学报（医学版）, 2004, 36(5): 491-495.

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