摘要： 目的:建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础.方法:构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度.通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响.结果:转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外.四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白.四环素质量浓度在2 mg/L并作用60 h其表达水平即可达到最高峰.P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用.结论:已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型.
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