摘要：

目的：通过体外细胞培养实验，观察分析壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥、β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate, β-TCP) /磷酸钙骨水泥、含钾磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响以及固化后10 d细胞的生物活性变化。方法：首先以兔的骨髓为组织来源，采用密度梯度分离法和贴壁分离法分离培养原代兔骨髓基质细胞（rabbit marrow stromal cell，rMSC），通过流式细胞分析和分选得到成分比较单一的兔骨髓基质细胞，经过体外诱导得到兔成骨细胞，用茜素红染色法验证其成骨功能。将rMSC分别与上述3种骨水泥固化块及其浆料复合培养，空白对照组是直接在24孔板上接种细胞，每组4个样本。在复合培养的第1、4、7、10天，通过酸性磷酸酶（acid phosphatase assay，APA）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性测定，检测细胞的增殖和分化能力；吖啶橙（acridine orange，AO）染色后荧光显微镜观察，对细胞进行计数并分析。环境扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的生长、黏附状况。各组结果进行双因素方差分析，用LSD法进行组间比较。结果：3种骨水泥浆料在固化过程中均对rMSC有较大影响，细胞的增殖活性（复合培养第10天APA活性浆料组吸光度平均值分别为0.049，0.050，0.049；固化块组分别为0.898，0.867，0.909；P<0.001）和分化能力 (复合培养第10天ALP活性浆料组平均值分别为0.775，0.782，0.798 U/g protein；固化块组分别为49.288，49.631， 49.744 U/g protein； P<0.001) 均明显低于固化块组，细胞数目也明显减少(复合培养第10天细胞数目每视野平均为3.7，3.7，3.7个；固化块组分别为91.1，89.7，93.7个，P<0.001)，且这种影响是不可恢复的；rMSC在3种骨水泥的固化块上能较好地黏附，细胞数目、增殖和分化能力基本不受影响。结论：可注射性磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞有较大的影响，用成骨细胞复合浆料前需对细胞采取保护措施。

关键词: 成骨细胞, 磷酸钙类, 骨代用品