基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素

北京大学学报（医学版） ›› 2005, Vol. 37 ›› Issue (4): 436-439.

基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素

杨丽君,郁卫东,梁蓉,尚美,郭静竹

(北京大学人民医院1.儿科,2.中心实验室,北京 100044)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-08-18 发布日期:2005-08-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-08-18 Published:2005-08-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:对影响现有微量基因组扩增方法--简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotideprimed PCR,DOP-PCR)的因素进行探讨.方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的DNA模板来源、模板梯度稀释与否以及DOP-PCR扩增产物是否采用低熔点胶回收去除干扰分析的小片段等方面进行研究,最后以特异性基因(FTCD和CBS)PCR扩增的结果作为评价指标,了解上述因素对DOP-PCR扩增的影响.结果:以小鼠单个卵细胞基因组为模板与以肝基因组DNA为模板相比,在产量上前者明显低于后者,特异性上两者相当.小鼠肝基因组DNA梯度稀释作为模板进行扩增的结果没有明显差异.与未经低熔点胶回收的DOP-PCR产物相比,经低熔点胶回收的DOP-PCR产物在常规PCR扩增反应中得到的产物特异性更好.结论:应用DOP-PCR方法进行扩增时,小鼠单个卵细胞可以用来进行DOP-PCR的扩增从而用于对特异性基因的检测,但是在扩增产量方面需要进一步的改进或优化.对现有DOP-PCR反应进行产物低熔点胶回收纯化,能够增加产物的特异性,效果满意.

关键词: 基因扩增, DNA引物, 聚合酶链反应, 小鼠

杨丽君, 郁卫东, 梁蓉, 尚美, 郭静竹. 基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素[J]. 北京大学学报（医学版）, 2005, 37(4): 436-439.

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