摘要： 目的:对影响现有微量基因组扩增方法--简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotideprimed PCR,DOP-PCR)的因素进行探讨.方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的DNA模板来源、模板梯度稀释与否以及DOP-PCR扩增产物是否采用低熔点胶回收去除干扰分析的小片段等方面进行研究,最后以特异性基因(FTCD和CBS)PCR扩增的结果作为评价指标,了解上述因素对DOP-PCR扩增的影响.结果:以小鼠单个卵细胞基因组为模板与以肝基因组DNA为模板相比,在产量上前者明显低于后者,特异性上两者相当.小鼠肝基因组DNA梯度稀释作为模板进行扩增的结果没有明显差异.与未经低熔点胶回收的DOP-PCR产物相比,经低熔点胶回收的DOP-PCR产物在常规PCR扩增反应中得到的产物特异性更好.结论:应用DOP-PCR方法进行扩增时,小鼠单个卵细胞可以用来进行DOP-PCR的扩增从而用于对特异性基因的检测,但是在扩增产量方面需要进一步的改进或优化.对现有DOP-PCR反应进行产物低熔点胶回收纯化,能够增加产物的特异性,效果满意.
| [1] | 袁婷婷,李燊,吴燕,吴海涛. 长期自由选择饮酒小鼠模型的建立及其行为学评价[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(2): 315-323. |
| [2] | 张京,宋佳桂,王振斌,龚玉清,王天卓,周津羽,战军,张宏权. Kindlin-2通过mTOR和Hippo信号通路调节小鼠子宫内膜发育[J]. 北京大学学报（医学版）, 2022, 54(5): 846-852. |
| [3] | 焦翠,王俭妹,况海霞,武志红,柳涛. CACNA1H基因敲除对小鼠孤独症样行为及海马神经元形态学的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2022, 54(2): 209-216. |
| [4] | 贾睿璇,姜尚伟,赵琳,杨丽萍. Cyp4v3基因敲除小鼠模型的表型分析[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(6): 1099-1106. |
| [5] | 朱忆颖,闵赛南,俞光岩. 局部注射环孢素A对非肥胖糖尿病小鼠下颌下腺分泌功能及炎症的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(4): 750-757. |
| [6] | 池彦廷,张延平,张秋露,刘翠苓,李斌斌. 唾液腺干燥综合征继发黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的临床病理分析[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(1): 40-45. |
| [7] | 朱梅青,崔蓉. 高效液相色谱法测定小鼠血浆中苯并三唑类紫外线吸收剂UV-327和UV-328[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(3): 591-596. |
| [8] | 张晓威,殷华奇,李清,赵永平,KiteBrandes,白文俊,徐涛. 人类趋化素样因子超家族2参与小鼠精子形成[J]. 北京大学学报（医学版）, 2019, 51(2): 228-233. |
| [9] | 吴天伟，崔蓉，张宝旭. 高效液相色谱法测定小鼠血浆中8-甲氧基补骨脂素及其药代动力学研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(5): 792-796. |
| [10] | 康磊，霍焱，王荣福，张春丽，闫平，徐小洁. MicroRNA-155靶向的放射性标记探针对乳腺癌小鼠模型的活体显像[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(2): 326-330. |
| [11] | 张伟，庞春艳，王永福. 脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(6): 974-978. |
| [12] | 王芳, 张琰琴, 丁洁, 俞礼霞. 多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(5): 760-767. |
| [13] | 孙睿, 高波, 郭传瑸. 裸小鼠淋巴结的解剖和组织学特点[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(5): 893-898. |
| [14] | 高丽，于晓潜，蔡宇. 丝线结扎及局部涂抹牙龈卟啉单胞菌对小鼠牙槽骨骨吸收的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(1): 31-035. |
| [15] | 王志华，张伟，张艳清，庞春艳，王永福. CD40 siRNA对 MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2016, 48(5): 771-776. |
|
||
