目的:建立兔髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系.方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔髁状突软骨细胞,在二维贴壁培养条件下增殖至P2代;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质,进行三维培养;分别对培养细胞凝胶微球行石蜡包埋与树脂包埋切片,对三维培养条件下的软骨细胞行组织化学、免疫组织化学检测和超微结构观察.藻酸盐凝胶三维体系培养6周后,以EDTA分解凝胶,收获培养的软骨细胞,免疫组化法检测三维体系中收获的软骨细胞的蛋白合成能力.结果:藻酸盐凝胶三维培养体系中的髁状突软骨细胞生长状态良好;培养6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性功能蛋白表达水平较转入三维体系前未见降低,培养细胞保持了良好的分化表型.结论:成功地建立了髁状突软骨细胞的藻酸盐凝胶三维培养体系,在该体系中,软骨细胞生长状态与功能蛋白分泌能力良好.

目的:研究血管化自体颌下腺移植术后失神经支配腺体的病理变化,探讨其分泌机制.方法:在摘除泪腺建立家兔角结膜干燥症模型的基础上进行血管化自体颌下腺移植,于移植术后分别对不同时间失神经支配腺体组织切片行HE染色、S-100蛋白抗体免疫组化染色,光镜观察,制做电镜标本透射电镜观察.结果:移植后早期可见腺实质部份轻度萎缩变性样改变,神经节及神经纤维不同程度变性.长期观察腺体结构正常,腺体内可见健康的神经节及神经纤维.电镜观察见腺泡细胞内较多分泌颗粒.结论:移植腺体能保持旺盛的分泌功能,失神经支配腺体未见萎缩.

目的:探讨内置式颌骨牵引成骨在治疗骨性颞下颌关节(temporomandibular joint, TMJ)强直伴小颌畸形并发阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)中的应用.方法:应用内置式颌骨牵引成骨,治疗11例(15侧)TMJ强直伴小颌畸形及OSAS患者.患者年龄9～42 岁.4例为双侧颞下颌关节强直伴重度小颌畸形,7例为单侧TMJ强直伴小颌畸形.9例合并重度OSAS,2例伴有轻、中度OSAS.8例患者行双侧下颌骨体延长,3例患者行单侧下颌骨体延长.11例患者15侧TMJ强直均行牵引成骨关节成形术.术后复查10～22 个月,平均复查时间15.3 个月.手术包括两个阶段:第一阶段,小颌畸形的牵引成骨治疗;第二阶段,TMJ强直的牵引成骨关节成形术.术后间歇期4～7 d,牵引速度1 mm*d-1,分4次进行.稳定期为3～4个月.术后即行开口训练.每一患者术前、术后均行X线头影测量及睡眠多导图仪(polysomnography, PSG)检查.结果:11例患者19侧下颌骨经牵引延长后,小颌畸形及OSAS得到有效治疗.15侧关节强直经牵引成骨关节成形术矫治后,开口度均恢复正常.牵引间隙内成骨良好,未见感染及成骨不良等并发症发生,无关节强直复发.结论:牵引成骨技术可有效矫治TMJ强直导致的小颌畸形伴OSAS,并为关节成形提供了新的治疗手段.手术方法简便,风险小,治愈率高,近期效果稳定.远期疗效有待进一步观察.

目的:观察大白鼠骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)的体内成骨方式,研究新生骨组织的生物学特点、形态及骨基蛋白的表达.方法:取2月龄SD大鼠的胫骨及股骨骨髓进行培养,体外培养的BMMSCs经成骨诱导剂诱导后分别与羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷(hydroxyapatite/tricalcium phosphate ceramics, HA/TCP)、羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷加藻酸钠(alginate sodium, AS)移植入BALB/C裸鼠皮下.2个月后取出种植物,组织切片观察成骨方式及成骨类型.用免疫组化法对新生骨骨基质蛋白的表达进行检测.结果:BMMSCs + HA/TCP与BMMSCs + HA/TCP +AS均为膜性骨发生,2个月内所成的骨为层板骨.此方法所成骨的骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原均有表达.结论:BMMSCs通过HA/TCP以膜性骨发生方式成骨,2个月内成的骨为层板骨.所成的骨与胚胎发育的骨在骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原的表达无区别.

目的:研究人类龈沟液中性粒细胞弹力酶的动态活动方式和最高活性率,从而探讨其作为一项定量检测牙周状况指标的可能性.方法:利用滤纸条法,从33例慢性牙周炎患者提取217份龈沟液样本,用中性粒细胞弹力酶的特异性底物对该酶在龈沟液中的活性进行动态定量测量,从而计算该酶最高活性率(MR-EA,单位为每个牙部位mAbs*min-1),并将结果与临床牙周状况进行综合比较分析.结果:龈沟液中性粒细胞弹力酶可分为5种不同的酶活动方式(A,B,C,D,E),其相应的MR-EA存在显著差异(P＜0.01).在临床牙周状况相同的牙部位,弹力酶活动差异有显著性,各种临床部位的弹力酶活动方式高(A%+B%)/低(D%+E%)分布情况如下:健康部位0%/92%,牙龈炎部位6%/72%和牙周炎部位21%/54%.健康部位的MR-EA值≤3.0,而病变部位的MR-EA值存在明显差异,具体分布如下:75%牙龈炎部位的MR-EA≤3.0,13%＞6.0,4%＞10.0;而60%牙周炎部位的MR-EA值≤3.0,30%＞6.0,21%＞10.0.结论:MR-EA能作为定量测定龈沟液中性粒细胞弹力酶活动的适当指标,可以用来定量检测牙周状况.

目的:了解rhIL-6对成牙骨质细胞(cementoblasts, CBs)增殖活性及分泌骨钙素(osteocalcin, OC)能力的影响.方法:试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs.实验组培养液为10%(体积分数)FCS+RPMI1640加不同(质量)浓度的rhIL-6,对照组不加rhIL-6.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察CBs生长及存活状态;放射免疫分析法测定CBs培养上清液中OC的含量.结果:rhIL-6对CBs的生长有抑制作用,并呈剂量依赖趋势,但无统计学意义(P>0.05);同一(质量)浓度rhIL-6在不同的培养时间段对CBs分泌OC的影响不同,除0.1 μg*L-1 IL-6组外,1、10、100 μg*L-1组上清液中的OC浓度在最初的5 d内有明显增高,以100 μg*L-1组最显著,呈浓度依赖性,但在第7天时,100 μg*L-1组的OC浓度明显下降至仅略高于第3天的水平.0.1、1和10 μg*L-1组在第3天和第7天时,OC浓度均低于空白对照组.结论: IL-6可能通过调节CBs的生长和OC的分泌而在CBs的代谢及牙骨质的形成、修复中发挥一定的作用.

目的:判断sonic hedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达.方法:用RT-PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达.设计Shh及其受体Ptc的PCR引物;选取新生鼠第1天(P1)、第3天(P3)、第7天(P7)的牙胚为研究对象,提取总RNA.两步法进行RT-PCR反应,10 g*L-1琼脂糖电泳观察.结果:出生后第1天、第3天、第7天小鼠牙胚RT-PCR产物可见Shh、 Ptc条带.结论:Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期有表达.

目的:研究恒牙早期青少年上气道形态和舌骨位置.方法:对45名矢状和垂直骨面型正常、磨牙关系中性的恒牙早期青少年进行X线头影测量分析,并比较性别差异.结果:得出反映上气道深度和舌骨位置的14项X线头影测量正常值和变异范围,作为临床恒牙早期错患者的诊断、治疗参考.结论:恒牙早期上气道深度女性较男性偏大,以腭咽部显著;舌骨位置男性较女性偏前下.

目的:明确正畸粘接用树脂改良型玻璃离子粘固剂(resin-modified glass ionomers)释放氟离子情况并检测其吸收外界氟离子和再释氟性能.方法:实验分3组,分别用Advance和GC Fuji Ortho树脂改良型玻璃离子粘固剂以及DM复合树脂粘接剂(composite resin)作为研究对象.每组中包括5个由同一材料制作的标准圆柱体型样本.实验第1～12天将样本放置在去离子水中.第13～15天,每天用含氟牙膏处理10 min后放置于去离子水中.利用氟离子选择性电极检测不同材料每天释放出的氟离子浓度.结果:玻璃离子粘固剂在整个实验期间都能释放一定量的氟离子.第1天的氟释放量最大,以后明显减少,在第13天(含氟牙膏处理的第1天)玻璃离子粘固剂的氟释放量出现回升,约是处理前(第12天)释放量的1.6倍.GC Fuji Ortho粘固剂的氟释放量高于Advance粘固剂,差异有显著性(P＜0.01).复合树脂粘接剂基本没有氟离子释放,即使经过含氟牙膏处理后,也没有明显的氟离子再释放现象.结论:体外研究中,树脂改良型玻璃离子粘固剂具有释放氟离子、吸收外界较高浓度氟离子并再释放的特点.提示其可能会起到抑制托槽周围釉质脱矿和促进釉质再矿化的作用.

目的:通过测定去势大鼠血清中的白细胞介素1β(interleubin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα),探讨细胞因子在绝经后骨质疏松发病中的意义.方法:3月龄雌性SD大鼠随机分为3组,假手术组、手术未用药组和手术用药组,后2组摘除双侧卵巢,用药组每周3次腹腔注射阿仑膦酸钠(alendronate,ALN).12周后处死,单光子骨矿测定仪测下颌骨和股骨骨密度,以放射免疫测血清中IL-1β和TNFα的浓度.结果:手术未用药组下颌骨骨密度明显低于假手术组(P<0.01),手术用药组下颌骨密度明显低于假手术组(P<0.05).手术未用药组股骨密度明显低于假手术组(P<0.05),应用ALN后股骨密度明显高于未用药组(P<0.01).手术未用药组血清骨钙素水平明显高于假手术组(P<0.01),也明显高于手术用药组(P<0.05);用药组骨钙素水平高于假手术组,但差异无显著性.血清中IL-1β和TNFα的浓度3组之间差异均无显著性,但手术未用药组两种因子血清含量均高于假手术组和用药组;用药组血清中IL-1β和TNFα水平与假手术组接近.结论:雌激素缺乏,IL-1β和TNFα水平升高,骨吸收活性增加,骨转换率加速,导致骨质疏松.

目的:研究和评价一种新型镍钛根管器械--GT手用锉预备弯曲根管的成形效果、器械断裂情况及预备时间等.方法:选取门诊牙髓病和根尖周病患者中具有弯曲根管的病例23例,应用GT手用锉和平衡力技术进行根管预备,标准牙胶尖和根管封闭剂AHplus采用不加热的侧向加压方法完成根管充填,根据治疗前、中、后的X线片评价根管预备和充填效果.结果:完成的所有病例中GT手用锉均能很好维持根管弯曲度和流畅度,形成连续锥度的根管形态,弯曲根管平均预备时间(9.75±3.87) min,预备过程中根管无阻塞及偏移,仅1例器械折断,取得了较好的根管充填效果.结论:GT手用锉预备弯曲根管安全有效,预备后根管形态具有良好锥度和流畅度,GT器械预备技术可作为临床上预备弯曲根管的有效方法.

目的:构建趋化因子受体CXCR4反义 RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法:用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中获得目的基因,并以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(fluorogenic-quantitative PCR,FQ-PCR)测定假病毒滴度,进一步感染NIH/3T3 细胞. 结果: CXCR4正、反义RNA 的真核表达载体,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/3T3细胞,目的基因在该细胞中得到整合与表达.结论:从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达,为进一步研究CXCR4反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础.

目的:观察同型半胱氨酸 (homocysteine, HCY )对人脐静脉内皮细胞左旋-精氨酸/一氧化氮(L-arginine/NO)途径的影响及HCY致血管损伤的机制.方法:将培养的人脐静脉内皮细胞随机分4组(每组n=6),加入HCY使终浓度分别为0、0.01、0.1 和1 mmol*L-1,培养12 h后,检测内皮细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出及细胞L-arginine转运、一氧化氮合酶(nitricoxide synthase, NOS)活性和亚硝酸盐(NO2 )生成的变化. 结果:与对照组相比, 0.1 mmol*L-1HCY增加LDH 漏出, 1 mmol*L-1HCY降低细胞存活率, 增加LDH 漏出; 0.1、1 mmol*L-1组NO 生成显著降低,但仅在1 mmol*L-1组才降低NOS活性.HCY 呈浓度依赖地降低内皮细胞L-arginine 转运,0.01 mmol*L-1 HCY即明显抑制细胞L-arginine 转运速率, 0.1、1 mmol*L-1HCY不仅显著降低细胞L-arginine 最大转运速率,而且增高米氏常数, 降低了转运效率.结论:HCY损伤人血管内皮细胞L-arginine/NO 途径,尤其是抑制细胞L-arginine 转运,这可能是HCY 导致心血管疾病时心血管功能和结构损伤的重要机制之一.

目的:研究稀土离子Ln3+及其柠檬酸根配合物[Ln(Cit)2]3-诱导人红细胞的溶血作用.方法:将不同浓度的Ln3+或[Ln(Cit)2]3-与人红细胞温育后,用分光光度法测定离心上清液中的血红蛋白浓度,计算相对溶血率H%.用外推法确定临界溶血浓度cH0.结果:14种稀土离子对人红细胞的临界溶血浓度cH0已经确定;发现[Ln(Cit)2]3-的H%～c关系曲线为非对称的"钟"型曲线,结论:稀土离子Ln3+具有较低的临界溶血浓度,这说明Ln3+与红细胞有较强的作用及细胞毒性.[Ln(Cit)2]3-诱导的人红细胞相对溶血率H%与稀土离子在介质中的物种分布有关.

目的:探索衰老相关新基因.方法:采用RAPD法筛选衰老相关的DNA片段,采用Southern blot 分析基因状态,Northern blot 分析mRNA水平.结果:筛选出衰老特异的DNA片段,长894 bp,命名为sad.将sad片段克隆、测序,查询GenBank,确认为一种新的衰老相关序列,基因登录号为AQ324104.Southern blot分析表明,sad基因可能是一种单拷贝基因;sad在衰老2BS细胞中的Southern blot图谱不同于年轻细胞,而与人胃癌细胞系BGC-823类似.Northern blot分析显示,sad基因具有表达活性,其RNA长约0.5 kb,相对水平在各代龄的细胞间差异无显著性.结论:sad是一种新的与衰老相关的DNA片段,sad基因可能为单拷贝基因,具有表达活性.

目的:研究一营养不良型大疱表皮松解症家系的基因突变.方法:用组织病理,超微电镜及免疫荧光方法结合临床表现诊断为显性营养不良型大疱表皮松解症,采用聚合酶链反应,DNA直接测序以及限制性内切酶反应的方法对一营养不良型大疱表皮松解症家系进行基因突变情况的检测.结果:家系中患者及其父均存在COL7A1基因上第6376位的G突变为A,导致Ⅶ胶原2088位的甘氨酸被谷氨酸替代,而对照的健康人不存在此突变.结论:G2088E是引起该家系临床病变的特异突变,不是多态性变化.

目的:研究肠道非霍奇金淋巴瘤B细胞型的Epstein-Barr(EB)病毒感染、p53、p21ras基因表达及其相关性.方法 :应用单克隆抗体、免疫组化方法对瘤细胞进行免疫表型研究,CD20、CD45RA、CD79a 鉴定瘤细胞的B细胞分化,CD45RO、CD3除外瘤细胞T细胞分化.同时用免疫组化方法,检测瘤细胞p53基因表达、p21ras基因表达.EB病毒寡核苷酸探针(EBER)原位杂交,观察瘤细胞EB病毒感染情况.结果:34例肠道B细胞淋巴瘤好发部位为回肠和结肠,以单发瘤结节多见,常伴有表面溃疡形成.34例中,弥漫性大B细胞淋巴瘤9例(26.5%),19例为惰性的边缘区B细胞淋巴瘤黏膜相关淋巴组织型(MZL-MALT型)(55.9%),6例为MZL-MALT型伴高度恶性转化(17.6%).EBV- EBER 原位杂交检测,全部病例为阴性.p53蛋白表达共有23例,占全部病例的67.6%(其中高度恶性占47.8%);16例有p21ras的表达,为47.1%(其中高度恶性占43.8%).有15例同时检出p53蛋白和p21ras的表达,占病例数的44.1%.结论 :34例肠道B细胞淋巴瘤以惰性为多见,但恶性转化明显.EBV的研究提示肠道B细胞淋巴瘤有别于T细胞淋巴瘤,与EBV感染无关.p53蛋白的表达高于p21ras,p53和p21ras的共同表达检出率较高,提示癌基因p53和p21ras在肠道B细胞淋巴瘤的发生中可能起一定作用.

目的:构建高血压相关基因和蛋白质数据库,以促进高血压医学生物信息学的研究.方法:以GenBank、LocusLink、GDB、GenCard、Proteome等数据库作为信息数据来源;根据高血压相关信息的内容将数据库设计为基因、蛋白质和功能3部分;编写软件从上述信息资源中获取数据,分类整理,存入数据库,利用软件的管理和查询功能对于本地数据进行管理和检索.结果:经过OMIM、文献和相关数据库的检索,目前确定了431个高血压的相关基因,379个蛋白质;建立高血压相关基因和蛋白质数据库,并对其内容进行初步分析.最终实现了网上发布和查询.结论:通过整合现有相关信息,建立一个种类繁多、内容齐全与高血压相关的二级数据库,为高血压和心血管的研究提供一个新的便捷的生物信息查询的工具.

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用及其作用受体.方法:体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,以AⅡ10-11～10-5 mol*L-1孵育24 h,采用流式细胞术及TUNEL方法检测凋亡细胞;然后加入AⅡⅠ型受体阻断剂氯沙坦与AⅡ共同孵育,观察其对AⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响.结果: AⅡ 10-11 mol*L-1组凋亡细胞数量与对照组差异无显著性[(14.63±3.18)% vs (10.55±2.67)%, P>0.05]; AⅡ10-9 mol*L-1组凋亡心肌细胞数量显著高于对照组[(22.18±3.59)% vs (10.55±2.67)%, P<0.01]; AⅡ浓度为10-9 mol*L-1、10-7 mol*L-1和10-5 mol*L-1三组间,凋亡细胞数量差异无显著性[(22.18±3.59)%, (19.07±3.27)%, (25.06±5.64)%,P>0.05].氯沙坦抑制AⅡ诱导的心肌细胞凋亡[(12.87±4.31)% vs(19.07±3.27)%,P<0.05].TUNEL染色支持以上结果.结论:血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其作用可能通过AⅡⅠ型受体介导.