北京大学学报(医学版) ›› 2001, Vol. 33 ›› Issue (4): 366-369.

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人β2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定

陈占昆,吕厚山,艾京,蒋东芳,丁海明,王东,王申五,冯传汉   

  1. ^A北京大学人民医院.关节病研究中心^B北京大学医学部第二临床医学院(北京人民医院)^C1447^D1%^A中心实验室^B中心实验室^C454033^D2
  • 出版日期:2001-08-28 发布日期:2001-08-28

  • Online:2001-08-28 Published:2001-08-28

摘要: 目的:制备人β2m转基因小鼠,研究HLA-B2704的表达.方法:应用显微注射将人β2m基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵,出生动物及其后代经PCR筛选,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数,利用RT-PCR检测阳性鼠中人β2m转基因的表达.结果:6只原代仔鼠及7只它们的下一代(F1)带有人β2m基因.由微注射基因后移卵出生的86只小鼠中,C57BL/6×昆明鼠杂交仔鼠35只,其中4只阳性(11.4%),昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠51只,其中2只阳性(3.9%),含有人β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠20只,其中7只阳性.整合的转基因均为单拷贝.Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合.阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达.结论:在转基因动物制备中,C57BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代.与人HLA-B2704基因相比,人β2m基因不易整合,其整合率与整合拷贝数均较低.得到的人β2m转基因小鼠能够将人β2m基因传给下一代并可与人HLA-B2704转基因鼠交配.

关键词: 小鼠, 转基因, 人β2m基因, 基因组,

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