重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性

北京大学学报（医学版） ›› 2003, Vol. 35 ›› Issue (4): 360-363.

重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性

王露,范慧,莫晓宁,张颖妹,魏征人,钟英成,黄大无

(1.北京大学人类疾病基因研究中心,北京 100083;2.北京北医联合生物工程公司)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2003-08-18 发布日期:2003-08-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2003-08-18 Published:2003-08-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线, 获得高纯度的PDCD5蛋白,并观察其稳定性.方法:以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200两步层析分离获得PDCD5蛋白.选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度,SDS-PAGE检定蛋白质的稳定性.结果:经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为100%,相对分子质量15 800,等电点5.9. 生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL-60细胞的凋亡,呈现一定的量效关系.稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定,对温度敏感,4 ℃和25 ℃极易降解,而-20 ℃和冻干保存则相对稳定.结论:本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白.稳定性实验提示PDCD5宜在-20 ℃以下或冻干保存.

关键词: PDCD5, 重组蛋白质类/分离和提纯, 凋亡, HL-60细胞

王露, 范慧, 莫晓宁, 张颖妹, 魏征人, 钟英成, 黄大无. 重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性[J]. 北京大学学报（医学版）, 2003, 35(4): 360-363.

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