目的:鉴定由肝细胞癌(HCC)相关新基因LAPTM4B编码的蛋白质并研究其生物学特性.方法:以Western blot、免疫组化及双向电泳鉴定新基因的表达产物;以免疫共沉淀等方法研究分子间的相互作用. 结果:LAPTM4B基因编码相对分子质量分别为35×10³和24×10³、等电点分别为9.07和4.65的两种异型分子.它们在肝癌组织及肝癌细胞系的表达显著上调,而相对分子质量为35×10³者尤为明显,并与细胞分化程度相关.LAPTM4B蛋白可与整合素α 6亚单位及表皮生长因子(EGF)受体形成信号复合物.结论:LAPTM4B-35蛋白在人肝癌组织及细胞系过表达,并可能通过与细胞表面的整合素受体及EGF受体形成复合物而参与细胞外基质成分所启动的信号转导.

目的:研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B 对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响,探讨LAPTM4B基因的生物学功能.方法:构建真核表达质粒pcDNA3-TM4B,利用脂质体稳定转染LAPTM4B cDNA至NIH3T3细胞中,用RT-PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B 基因高表达的单克隆细胞株,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化.结果:与转染空载体的对照组相比,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化,微绒毛的数量和长度增加,多分枝且缠绕成团.转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附/铺展能力增强.生长曲线显示转染细胞的生长速率增高.流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多,而G0～G1期细胞数减少.Western杂交显示Cyclin E蛋白在转染细胞中的表达显著增加.转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性.结论:LAPTM4B基因能影响细胞增殖的调节,促进NIH3T3细胞的增殖,并使NIH3T3细胞具有成瘤性,在肿瘤发生过程中具有重要的作用.

目的:以程序化死亡分子5(PDCD5)为靶分子,对其核酸与蛋白质序列进行生物信息学分析,为PDCD5功能的实验研究提供基础,同时也为人类功能基因的生物信息学分析提供新的技术路线.方法:利用数据库相似性搜索、同源物结构比较、表达谱分析和查询基因"邻居"等技术进行数据发掘和数据综合分析.结果:发现人PDCD5在12号和5号染色体上分别存在返座假基因(retropseudogene),小鼠1号染色体也存在小鼠PDCD5 cDNA的返座假基因.热自养甲烷杆菌的PDCD5同源物、泛素及核糖体蛋白S13具有与人PDCD5相似的折叠方式.线虫的PDCD5同源物、泛素及IAP(inhibitor of apoptosis proteins)分子等在表达谱拓扑图上属于同一基因簇成员,该基因簇与生物合成和蛋白质合成相关.PDCD5同源物在多个基因组中与多种核糖体蛋白相邻.结论:PDCD5存在2个拷贝的假基因.PDCD5除参与细胞凋亡外,预测还与泛素有功能相关性,并可能参与蛋白质的翻译调控.

目的:建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线, 获得高纯度的PDCD5蛋白,并观察其稳定性.方法:以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200两步层析分离获得PDCD5蛋白.选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度,SDS-PAGE检定蛋白质的稳定性.结果:经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为100%,相对分子质量15 800,等电点5.9. 生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL-60细胞的凋亡,呈现一定的量效关系.稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定,对温度敏感,4 ℃和25 ℃极易降解,而-20 ℃和冻干保存则相对稳定.结论:本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白.稳定性实验提示PDCD5宜在-20 ℃以下或冻干保存.

目的:研究老年人睾丸组织基因表达谱变化,为研究老年人睾丸功能衰退机制奠定基础.方法:知情同意下获取正常青年人和老年人睾丸组织标本各3例,采用QIAGEN RNA提取试剂盒提取总RNA,分别等量混合后制备探针.利用ClonTech公司生产的包含8 000个已知基因的人类cDNA基因芯片[Atlas Plastic Human 8K Microarray (Cat.#7905-1)]筛选差异表达基因.按基因功能分类方法对老年睾丸组织中差异表达的基因进行归类分析.用RT-PCR、T-A克隆测序等方法选择目的基因,验证基因芯片结果.结果:筛选到差异表达基因117个(1.46%),83个基因在老年睾丸组织中表达下调,34个基因表达上调.在表达下调的基因中,代谢相关基因16个(19.3%),与基因和蛋白表达相关的基因18个(21.7% ),信号通路相关基因16个( 19.3% ),细胞分化相关基因19个(22.9%),细胞结构和运动相关基因6个(7.2%),细胞或内环境稳态相关基因4个(4.8%),未知功能基因4个(4.8%).在表达上调的基因中,代谢相关基因3个(8.8%),与基因和蛋白表达相关的基因10个(29.4% ),信号通路相关基因2个(5.9%),细胞分化相关基因11个(32.4%),细胞结构和运动相关基因8个(23.5%).RT-PCR及T-A克隆测序进一步证实呼吸链相关的基因cox7a2在老年睾丸组织显著上调,atp50显著下调.结论:老年人的睾丸组织中基因表达谱发生了明显变化,老年人睾丸功能衰退与多种基因表达变化有关,其中呼吸链功能相关cox7a2、atp50基因的显著差异表达可作为重要目的基因,可能对进一步研究睾丸功能衰退的机制具有重要意义.

目的:应用酵母双杂交系统筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,为该基因的功能研究提供线索.方法:构建AngRem104的真核表达载体AngRem104-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达, 进行毒性和自激活检验,与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互作用的蛋白.结果: AngRem104蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象. 筛选出的蛋白包括真核翻译延伸因子1α1、糖皮质激素受体AF-1特异延伸因子、β2-微球蛋白、巴戴-比德尔综合征2蛋白及4个与细胞代谢有关的蛋白.结论:AngRem104可能影响细胞内某些转录因子活性和细胞代谢,并与某些免疫相关疾病和遗传病发病有关.酵母双杂交结果为AngRem104的功能研究提供了重要线索.

目的:研究中国汉族家族性乳腺癌(familiar breast cancer, FBC)患者BRCA1的突变情况.方法:选取中国汉族9个乳腺癌家系中各1例乳腺癌患者,1例无肿瘤家族史的正常人,32例散发性乳腺癌患者和33例正常献血者.从外周血淋巴细胞中提取DNA,经PCR扩增后,以变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)初筛BRCA1所有编码外显子及部分内含子的多态性,对异常峰型者直接测序.结果:在9例家族性乳腺癌患者中,1例患者在外显子11上发现一处致病性突变 (3870delTGTC),该突变因缺失4个碱基导致框架移位.1例患者发现尚未见报道的密码子867单个碱基替换导致编码氨基酸的变异(E867R).8例患者在内含子18(IVS18+65)上检出已知的G→A变异,变异率为88.9%(8/9).该位点变异在散发性乳腺癌和一般人群中的检出率分别为37.5%(12/32)和33.3%(11/33).该8例患者同时检出密码子871已知的错义变异(P871L) 与内含子9(IVS8-57delT)的变异,且有1例患者在此3处的变异为纯合变异.这8例患者的检测结果提示,IVS18+65G→A 、IVS8-57delT与2731C→T这3个位点存在连锁.该连锁情况尚未见报道.2例患者在密码子1436发现已知为多态的改变(S1436S).1例患者在密码子771检出已知为多态的改变(L771L).另外在内含子区发现多处变异(IVS2+48C→T, IVS2+133C→T, IVS12+112C→A).结论:BRCA1突变在中国汉族家族性乳腺癌患者中有其自身特点,其突变热点有别于白人和犹太人.在中国家族性乳腺癌患者中进行BRCA1突变的进一步研究及寻找其它致病基因具有重要意义.

目的:探讨肿瘤坏死因子α/G308A多态性对早产的影响,于1997年7月至2001年6月,在安徽省安庆市医院进行了一项早产遗传影响因素的分子流行病学调查.方法:采用病例对照及核心家系的研究设计,于1997年7月至2001年6月,在安徽省安庆市医院收集了133个核心家系的资料.其中54个家系为早产家系,79个家系为正常分娩孕周家系.全血采用puregene-Kit试剂盒提取基因组DNA,PCR方法鉴定肿瘤坏死因子α基因型.结果:首先采用多元Logistic回归模型分析了婴儿肿瘤坏死因子α/G308A多态对早产的影响,以G308G同源野生基因型作为参照组,研究发现,A308A同源突变基因型能够显著增加早产的危险性[OR=0.039, 95%CI: 1.14～128.75].考虑到以人群为基础的病例对照研究由于人群遗传背景的异质性,从而可能导致疾病与基因之间统计结果的假相关,本研究进一步采用了以核心家系为基础的家系关联分析,发现308A突变等位基因隐性遗传模型结果和叠加模型结果均显示对早产产生不良影响,其P值分别为0.04和0.018,与多元Logistic回归模型的研究结果一致.结论:婴儿肿瘤坏死因子α/G308A基因中的308A突变等位基因与早产相关,可能为早产的遗传易感位点之一.

目的:研究胃癌组织中p16^INK4a和视网膜母细胞瘤易感基因(RB)启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系.方法:采用甲基化特异性PCR方法对81例胃癌和10例正常胃黏膜中p16INK4a和RB启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学方法对p16^INK4a和视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)表达情况进行相应检测.结果:胃癌中p16^INK4a和RB基因的甲基化率分别为37%(30/81)和42%(34/81);胃癌p16^INK4a蛋白和pRb表达阳性率分别为54%(44/81)和90%(73/81).10例正常胃黏膜中均未检测到p16^INK4a和RB异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性.p16^INK4a甲基化状况与其蛋白表达有相关性,但p16^INK4a甲基化状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移、性别及年龄均不相关.RB甲基化状态与pRb表达、肿瘤分化程度、性别及年龄无相关性,但与淋巴结转移相关.结论:p16^INK4a和RB异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件,可能参与了胃癌的发生发展过程.RB异常甲基化与胃癌淋巴结转移相关,提示RB甲基化检测对于分析胃癌淋巴结转移情况可能有一定参考价值.p16^INK4a基因启动子区域高甲基化是其蛋白表达抑制的重要机制.

目的:研究Fas、Fas配体(FasL)和干扰素-γ(IFN-γ)在胃癌中的表达规律及可能的意义.方法:在石蜡包埋的58例胃癌组织和其中相对应的53例癌旁正常组织中,采用免疫组化方法检测Fas、FasL蛋白的表达,采用原位杂交方法检测IFN-γ mRNA的表达.结果:胃癌组织中胃癌细胞和癌旁组织中胃上皮细胞Fas阳性率分别为19.0%和64.2%,胃癌组阳性率明显低于癌旁组(χ²＝23.46;P=0.00).胃癌组织中胃癌细胞和癌旁组织中胃上皮细胞FasL阳性率分别为63.8%和45.3%,胃癌组阳性率明显高于癌旁组(χ²＝3.83;P=0.05).癌旁组织中胃上皮细胞IFN-γ阳性率为49.1%,而胃癌组织中未发现一例阳性.结论:胃癌细胞Fas-FasL系统平衡失调,本研究中胃癌细胞不表达IFN-γ,可能与胃上皮细胞癌变及免疫逃逸有关.

目的:对11例中国慢性家族性良性天疱疮(Hailey-Hailey disease,HHD)患者进行基因突变研究.方法:根据病史、临床表现和组织病理诊断慢性家族性良性天疱疮,收集家系资料,提取外周血DNA,设计引物,采用聚合酶链反应、DNA直接测序、克隆测序等方法对11例非同家族的慢性家族性良性天疱疮患者ATP2C1基因进行突变检测.结果:11例患者中,发现3例提前终止突变,发现2例剪切位点突变.其中有4例的突变方式尚未见报道.结论:提前终止突变和剪切位点突变会影响转录和翻译的结果, 推断本实验所检测出的突变是造成相应家系临床病变的特异突变.

目的:以变性高效液相色谱分析(DHPLC)检测糖皮质激素受体基因(NR3C1)在中国人群中的变异情况.方法:提取64例中国人基因组DNA,参照文献所报道的引物序列,PCR方法扩增糖皮质激素受体基因编码区(2～9α外显子)及其邻近的部分内含子序列,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后,以DHPLC检测PCR产物,对洗脱曲线异常者进行DNA测序.结果:经DHPLC分析和DNA测序证实,研究人群的NR3C1基因中存在8处变异,5处为新发现;其中有2组变异呈紧密连锁的单倍型,均为首次报道,它们在人群中的基因型频率达3.1%与14.1%;另一处变异出现频率相对较低.结论:成功地建立了以DHPLC检测NR3C1基因变异的方法及技术参数,证实在中国人群中NR3C1基因存在变异,其中2种频率较高的单倍型为新发现.

目的:研究趋化素样因子1(CKLF1)对兔关节软骨细胞增殖及代谢的调节作用.方法:采用体外细胞培养技术及同位素参入法,检测CKLF1真核表达载体转染293T细胞所得条件培养基对软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖合成能力的影响.结果:在含5%(体积分数)胎牛血清(FCS)的DMEM培养条件下,转染后293T 细胞表达的CKLF1可抑制兔关节软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖的合成,并可促进诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的转录.结论:CKLF1可能通过提高iNOS的表达抑制关节软骨细胞增殖、胶原及蛋白多糖的合成.

目的: 研究TRAP基因在人肿瘤组织中的表达及其与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的作用相关性,探讨其在人肿瘤发生中的作用.方法: 通过原核表达TRAP蛋白免疫新西兰白兔,制备特异性多克隆抗体;免疫组化检测TRAP及hTERT在人肿瘤组织中的表达;通过构建TRAP真核表达载体、基因转染,观察TRAP对细胞hTERT转录、端粒酶活性和癌细胞生长及成瘤性的影响.结果:通过大肠杆菌表达的TRAP蛋白免疫、制备多克隆抗体,经Western blot鉴定与TRAP具有特异结合性;免疫组化显示247例恶性肿瘤中有213例TRAP阳性,表达率为86.2 %,而在所有癌旁组织中TRAP为阴性.另外,交界性及癌前病变与良性病变组织中TRAP表达差异也有显著性.进一步检测卵巢生发上皮肿瘤、乳腺癌、肝癌及中枢神经系统肿瘤组织hTERT表达,显示hTERT与TRAP表达的结果相一致.TRAP正义转染使hTERT及端粒酶活性升高,细胞增殖加快;而反义转染时,两者均下降,细胞增殖受抑.裸鼠成瘤性实验表明:正义TRAP使癌细胞成瘤性增强,而反义则抑制移植瘤的生长.结论: TRAP表达存在于人癌组织及部分癌前病变,与癌细胞恶性表型相关,并与hTERT表达一致.TRAP基因参与对端粒酶的调节作用,可能与人肿瘤发生有关.

目的:报道一个家族性淀粉样变性多神经病家族的临床特点、病理改变和基因检测结果.方法:先证者为52岁女性患者,于7年前反复出现恶心和呕吐,6年前出现便秘.5年前开始逐渐出现双下肢麻木伴出汗减少.3年前逐渐出现双侧下肢无力伴随肌肉萎缩,皮肤出现红色丘疹伴随瘙痒,2年前出现无痛性腹泻,从卧位站立时明显头晕.家族中患者的两个儿子分别在16岁和22岁出现反复的腹泻和手足麻木,妹妹、父亲和叔叔均出现类似临床表现.对先证者做左侧腓肠神经活检,并进行常规光镜和电镜检查,应用抗免疫球蛋白κ-和λ-链抗体以及抗tranthyretin (TTR)抗体进行免疫组织化学染色.提取先证者及其长子的外周血白细胞DNA,进行TTR及apolipoproteinA1基因的突变检测.结果:病理检查发现神经束内刚果红阳性物质沉积在血管周围并对神经纤维造成挤压.电镜检查显示小沉积物由大量的细丝组成.神经束内有髓和无髓神经纤维显著减少.免疫组化检查显示沉积物抗免疫球蛋白κ-和λ-链抗体以及抗TTR抗体均为阴性染色.分子遗传学检查显示先证者及其长子的TTR基因的所有4个外显子和apolipoproteinA1基因的所有外显子均未发现任何突变.结论:患者的病理改变符合系统性类淀粉变性周围神经病,结合遗传特点和临床表现考虑为家族性显性遗传性类淀粉周围神经病,但免疫组化和分子生物学结果不能进一步确定其分类.我们推测此家族可能是显性遗传性类淀粉周围神经病的一个新类型.

目的:探讨中国汉族人群中,注意缺陷多动障碍(ADHD)与多巴胺D4受体基因(DRD4)第3外显子48 bp和多巴胺载体蛋白基因(DAT1)非编码区40 bp可变数目顺向重复(VNTR)多态性的关系.方法:对340个ADHD患儿,202个ADHD核心家系和226个对照分别就DRD4 48 bp VNTR和DAT1 40 bp VNTR多态性进行检测,并进行ETDT、HHRR和病例对照的关联分析.结果:所测人群中的DRD4 48 bp的重复次数是2～6次,最常见的等位基因是4次重复(77%)和2次重复序列(19.4%);未发现7次重复序列或更长的片段.DAT1 40 bp的重复次数是6～7 和 9～11次,其中10次重复序列最常见(90.7%).在ADHD患儿中,长重复等位基因(DRD4的4～6次和DAT1的11～12次重复序列)比对照组多.未发现ADHD和DRD4的7次重复等位基因或DAT1的10次重复等位基因之间存在关联.结论:DRD4(按照性别分层后)和DAT1的长重复等位基因可以增加中国汉族儿童罹患ADHD的危险性.

目的:研究少汗性外胚叶发育不全引起先天缺牙的ED1基因突变.方法:对3个少汗性外胚叶发育不全核心家系进行外周血基因组DNA的提取.利用聚合酶链反应、DNA直接测序进行突变检测,进一步采用限制性内切酶酶切验证突变.结果:3个家系中的每位患者均存在ED1基因外显子不同位点的单碱基错义突变,分别为C412G、A1201G和C1375T,其中前两个突变位点是国内外首次报道的.结论:ED1基因的单碱基突变是引起此3个核心家系少汗性外胚叶发育不全的致病突变.

目的:研究中国大陆高血压人群中G蛋白β3亚单位(GNB3)基因C825T多态性的分布及与血浆肾素-血管紧张素系统(RAS)活性的关系.方法:确诊原发性高血压的患者408例作为试验组,140例健康成年人作为正常对照组,61例有高血压家族史的健康成年人作为高血压家族史阳性正常对照组.C/T多态性测定采用PCR-RFLP方法.结果:各组GNB3 825T等位基因频率为45.6%～56.4%,各基因型在原发性高血压患者与正常人间分布差异无显著性.TT型高血压患者有较高的醛固酮水平和较低的血浆血管紧张素转换酶活性.结论:G蛋白β3亚单位825TT基因型的中国大陆人群原发性高血压患者有较高的醛固酮水平和较低的血浆血管紧张素转换酶活性.

目的:克隆、表达A组着色性干皮病基因,鉴定重组蛋白.方法:以人扁桃腺的cDNA为模板,RT-PCR及巢式PCR扩增A组着色性干皮病基因的全部编码区,克隆入pBluescript质粒,DNA测序鉴定.酶切并连接到pTrcHis C载体,在大肠杆菌TOP10中表达.免疫印迹鉴定表达产物.结果:克隆了A组着色性干皮病基因的完整编码序列,表达了预期分子量的融合蛋白,经免疫印迹法检测具有免疫原性.结论:成功克隆了A组着色性干皮病基因,表达了其编码蛋白.为构建用于基因治疗的重组病毒奠定了基础.

目的:通过骨髓细胞移植对心肌梗死大鼠模型血管内皮生长因子及其受体表达的影响,探讨骨髓细胞移植改善缺血心脏功能的可能机制.方法:利用左前降支冠状动脉结扎术制备大鼠心肌梗死模型,然后行异体骨髓细胞移植;分别于术后1 d,3 d,7 d,14 d和28 d取材;利用免疫荧光和RT-PCR技术分析细胞移植对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flk-1)表达的影响和移植细胞的分化情况;通过免疫组化计算血管数量;应用血流动力学检测大鼠心脏功能在术后各时间点的变化.结果:VEGF和Flk-1在移植组动物的心肌梗死区残存细胞、梗死周边区细胞以及部分移植细胞内表达.移植组VEGF和Flk-1的mRNA表达明显高于对照组,分别于术后3 d和14 d达到高峰,以后逐渐减弱.术后7 d,14 d和28 d移植组血管数量较同期对照组明显增加,移植组心脏功能较对照组明显改善.术后14 d可在部分移植细胞中检测到心肌细胞或血管内皮细胞特异性蛋白的表达.结论:骨髓细胞移植通过上调移植细胞及受者内源性VEGF和Flk-1的表达,促进血管新生,进而改善缺血心脏功能.

目的:应用腺病毒介导的转基因方式转染人组织型金属蛋白酶抑制剂-4(TIMP-4)基因,以观察TIMP-4对球囊损伤后新生内膜形成的影响.方法:体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)并转染含有TIMP-4基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(AdTIMP-4),采用单层培养细胞刮片法,观察TIMP-4对细胞迁移的影响;以大鼠颈总动脉球囊损伤模型为研究对象,损伤后即刻经血管外膜分别转入盐水、空载腺病毒载体和含有TIMP-4基因的腺病毒载体,观察细胞迁移和新生内膜形成情况.结果:培养的VSMC转染AdTIMP-4后,细胞迁移明显受到抑制,与对照组相比抑制率为63.9%(P<0.01);在大鼠颈总动脉球囊损伤模型中,转基因后4 d时生理盐水组、空载腺病毒组和转染AdTIMP-4组内弹力板内的细胞数依次为(32.5±4.8)个细胞、(33.8±7.0)个细胞和(8.2±2.4)个细胞,转染TIMP-4可以显著抑制血管损伤后细胞向内膜的迁移;血管损伤后28 d时,转染TIMP-4组新生内膜面积与中膜面积比值与对照组相比降低了66.5%(P<0.01),空载腺病毒组与生理盐水组之间差异无显著性.结论:TIMP-4可以抑制培养的VSMC的迁移,局部干预可以明显抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后细胞的迁移和血管新生内膜的形成.

目的:观察大鼠趋化素样因子2(rCKLF2)的mRNA在心肌梗死后大鼠心脏组织的表达。方法:构建大鼠心肌梗死模型,分别于心肌梗死后1 d、3 d、1周、2周、3周(每个时间点各5例),取心肌梗死周边区心肌组织,提取组织总RNA,逆转录后行竞争性PCR,了解rCKLF2 mRNA的表达情况。结果:rCKLF2 mRNA在梗死心肌周边区的表达于术后上调,并呈动态变化,1周达峰值,为正常的6.7倍。结论:CKLF2可能参与心肌梗死的病理生理过程。

针对肿瘤侵袭转移过程中基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物的作用和调节机制进行了较深入的系列研究.在包括肺癌、前列腺癌和黑色素瘤的几组具有不同转移潜能的人肿瘤细胞系中,癌细胞产生MMP-2和MMP-9的能力与其侵袭转移能力密切相关.进一步通过反义基因转染技术证实,抑制MMP-9基因表达可以明显降低高转移癌细胞的体外侵袭及裸鼠体内自发转移能力.将金属蛋白酶组织抑制因子TIMP-1,TIMP-2和TIMP-3基因分别导入高转移癌细胞,可以观察到转染细胞的侵袭转移能力受到明显抑制.说明通过选择性抑制MMPs基因表达或增强TIMPs 基因表达均可在一定程度上达到抑制肿瘤侵袭转移的目的.与此同时,我们应用定时控制表达技术分别将正义或反义MMP-9基因导入MMP-9不表达或高表达的黑色素瘤细胞,通过四环素控制的分子开关成功实现了MMP-9基因的定时控制表达,为提高临床基因治疗的效果提供了初步实验依据.