北京大学学报(医学版) ›› 2005, Vol. 37 ›› Issue (2): 195-197.

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抗原修复液pH值及修复时间对免疫组化染色效果的影响

杜娟,石雪迎,郑杰,周敏,崔新   

  1. (北京大学基础医学院病理学系,北京 100083)
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-04-18 发布日期:2005-04-18

  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-04-18 Published:2005-04-18

摘要: 目的:探讨使P504S、P63、CD10 、Ki-67抗原抗体复合物在免疫组化检测中获得高表达的抗原修复条件.方法:取前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和人乳头状瘤病毒感染的外阴上皮组织,用10%(体积分数)中性缓冲甲醛固定液固定.用EnVision二步法行免疫组化染色, P504S、P63、CD10、 Ki-67分别作为前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和感染人乳头状瘤病毒的外阴上皮组织的一抗,使用统一的EnVisionTM二抗.每种组织皆分别使用3种不同的缓冲液进行抗原修复:pH 6.0的枸橼酸缓冲液、pH 8.0的乙二氨四乙酸二钠(EDTA)缓冲液和pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液.对每一种抗原修复液,应用4个不同的抗原修复时间:12 min、20 min、25 min和30 min.染色完成后,镜下对比不同条件下抗原抗体复合物表达的情况.结果:P504S在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复20 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;P63在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复30 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高; Ki-67在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复25 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;CD10在不同pH值的缓冲液中修复20 min或25 min效果相同,都能得到最强表达.结论:不同的抗原有其各自最适合的抗原修复液、pH值范围和最适修复时间.相对来说, 高pH值的EDTA-Tris缓冲液的修复效果要优于低pH值的修复液.

关键词: 抗原, 氢离子浓度, 免疫组织化学, 染色与标记

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