目的:将人增殖抑制基因(hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG 基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响.方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平,然后选择内源性hHSG表达水平较低的肺腺癌(A549)和内源性hHSG表达水平较高的宫颈癌(HeLa S3)细胞系,用电穿孔方法转染含有hHSG的真核表达载体(pEGFP-hHSG)24 h后,加入放线菌酮(CHX),采用细胞计数、MTT法观察hHSG对肿瘤细胞增殖抑制作用及对CHX的化疗敏感性的影响.结果:hHSG在不同组织来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达, pEGFP-hHSG转染到两种内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系后,这两种肿瘤细胞的生长增殖都明显受到抑制,同时外源性的hHSG也增强了这些肿瘤细胞系对CHX的敏感性.结论:外源性hHSG可不依赖其内源性表达水平而抑制肿瘤细胞的增殖,与CHX并用可增强肿瘤细胞对CHX的敏感性,具有协同作用.

目的: 了解北京市农村地区慢性阻塞性肺疾病(COPD)的流行病学特点和易患因素.方法: 对北京市延庆县5个自然村中40岁以上的1 624人进行入户调查.包括问诊(居住状况、生活和烹饪习惯、吸烟史、个人史、家族史和既往史等)、体检、填写流行病学调查问卷并进行肺功能检查.结果: 该地区COPD总患病率为9.11%,其中男性为15.05%,女性为3.76%.性别、年龄、吸烟史、家族史、14岁前经常咳嗽的病史、体重指数等因素在COPD组与非COPD组相比差异有统计学意义.该地区肺心病占COPD的发生率为18.24%,占40岁以上人口的1.66%.结论: COPD和肺心病在该地区患病率很高,性别、年龄、吸烟史、家族史、14岁前经常咳嗽的病史、体重指数与COPD的发生有密切的关系,而其他如室内、外环境,职业暴露等因素尚有待进一步的研究. COPD是严重危害人民健康的重大疾病,应得到重视.

目的:分析ABO血型不合对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT )的影响.方法: 对北京大学人民医院血液病研究所148例ABO血型不合的allo-HSCT受者按不同的移植方式进行分析,并选用同期85例ABO血型相合的受者作比较.结果:主要ABO血型不合骨髓移植(BMT)组红细胞输注量多,红系恢复时间长.ABO血型不合的BMT、外周血干细胞移植(PBSCT)以及BMT+PBSCT患者急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生率、巨细胞病毒(CMV)发生率及5年无病存活率与ABO血型相合患者相比差异无统计学意义.结论:ABO血型不合不影响造血干细胞移植的植活、主要合并症及预后.ABO血型不合的PBSCT与BMT相比,红细胞输注量少,红系恢复较快.

目的:分析异基因造血干细胞移植后肺炎的临床特点和病因谱.方法:总结北京大学血液病研究所1998至2001连续4年中255例异基因造血干细胞移植受者中发生移植后肺炎的资料.结果:66例发生移植后肺炎的患者累计发病72例次,总发病率25.9%;50例患者的移植后肺炎被治愈,占75%.病因分析显示,细/真菌感染性移植后肺炎12例次(16.7%),巨细胞病毒性肺炎22例次(30.6%),特发性肺炎综合征36例次(50.0%).总死亡率为22.7%.发生特发性肺炎综合征的患者较多伴发慢性移植物抗宿主病,免疫抑制剂治疗有效.结论:异基因造血干细胞移植后肺炎是移植后常见的合并症,其病因学包括感染和非感染因素,针对病因的治疗可以改善预后.

目的:利用微孔膜器官型脊髓组织片培养的方法,加入适当剂量的线粒体功能抑制剂丙二酸钠,造成选择性运动神经元数目减少从而建立肌萎缩侧索硬化症(ALS)的体外器官模型.方法:取出生后6天的SD乳鼠的腰段脊髓冠状切片后将脊髓片置于微孔膜上进行培养,首先经丙二酸钠量效检测确定最佳丙二酸钠剂量.在培养第3天时加入适量的丙二酸钠,维持此浓度继续培养至第15天时结束培养,并利用免疫组化方法行运动神经元及中间神经元计数.结果:经丙二酸钠量效检测后确定2 mmol/L为最佳加入剂量(存活率为75%,P<0.01).造模实验结果显示,对照组的脊髓片内的运动神经元数目为每半侧(15.29±1.70)个,丙二酸钠组为每半侧(11.00±2.45)个, 两组比较差异有统计学意义(P<0.01);两组中间神经元的数目略有减少,但两组间差异无统计学意义.结论:利用微孔膜进行器官型脊髓片培养并加入2 mmol/L丙二酸钠造成的此病理模型符合运动神经元病患者的特点,可重复性强,适用于ALS的发病机制、治疗等方面的研究.

目的:观察糖基化缺陷的血清IgA1是否可以与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)结合,并比较正常血清IgA1及糖基化缺陷的血清IgA1与HUVEC结合量的异同,探讨血清IgA1尤其是糖基化缺陷的IgA1在IgA肾病血管损伤中的作用.方法:Jacalin亲和层析提取正常人血清IgA1,唾液酸酶和/或半乳糖酶去除血清IgA1分子铰链区O-糖上连接的唾液酸和/或半乳糖,形成糖基化缺陷的IgA1,分别形成去唾液酸IgA1 (DesIgA1),去唾液酸去半乳糖IgA1 (Des/DeGalIgA1).分别用特异结合半乳糖或N-乙酰氨基半乳糖的花生凝集素(PNA)和蚕豆凝集素(VVL),以ELISA的方法检测酶切的充分性.流氏细胞技术检测并比较正常血清IgA1及糖基化缺陷的血清IgA1与HUVEC的结合量.结果:正常IgA1及DesIgA1,Des/DeGalIgA1均能与HUVEC结合.IgA1, DesIgA1,Des/DeGalIgA1与HUVEC的结合量用免疫荧光强度的中位数表示分别为2.67±0.35,4.62±1.09, 4.08±0.41(IgA1与DesIgA1相比,P=0.015;IgA1与DesIgA1/DeGalIgA1相比,P=0.049;DesIgA1与DesIgA1/DeGalIgA1相比,P>0.05).结论:IgA1分子可以与HUVEC相结合,唾液酸和/或半乳糖缺失的IgA1与HUVEC的结合量显著高于正常IgA1分子,提示血清IgA1尤其是糖基化缺陷的IgA1在IgA肾病的血管损伤中可能起着一定的作用.

目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)和结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化组织中的表达及二者的关系.方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型.将大鼠随机分为假手术组(5只)、模型组(6只)、依那普利治疗组(6只).术后9天处死各组大鼠,肾组织标本用过碘酸-席夫染色(PAS)确证肾间质纤维化病变.以免疫组织化学染色方法观察肾组织内tTG 和CTGF的表达部位,以及细胞外基质成份纤维连接蛋白(FN)的表达变化.用Western蛋白印迹方法分析肾组织内tTG 和CTGF蛋白表达水平.结果: 假手术组大鼠tTG,CTGF和FN分别在肾小管、肾间质区仅有微量表达,肾小球内无阳性表达;模型组大鼠tTG、CTGF和FN在肾小管、肾间质区的表达信号比假手术组强;依那普利治疗后三者表达减少.双重染色结果显示,在模型组肾间质tTG阳性表达部位同时表达CTGF,并且强度相似.Western blot结果显示,模型组tTG和CTGF蛋白水平明显高于假手术组;依那普利治疗组tTG和CTGF蛋白水平明显低于模型组.各组大鼠肾内tTG蛋白水平与CTGF蛋白水平之间(r=0.683,P<0.05)以及tTG蛋白水平与肾间质内FN半定量水平之间(r=0.737,P<0.05)均有显著相关关系.结论: tTG和CTGF可能共同参与肾间质纤维化,依那普利减轻肾间质纤维化的作用可能通过下调两者的表达而实现.

目的: 了解终末期肾脏病(ESRD)患者的钙磷代谢情况及全段甲状旁腺激素(iPTH)水平,分析其临床特征,为合理治疗提供依据.方法: 对2000年1月至2003年7月在我院准备进行透析治疗的100例ESRD患者的临床资料进行回顾性分析.结果:(1)在100例患者中,经白蛋白校正过的血清总钙分布为:低钙血症患者占15%;其余患者血钙正常或偏高(其中高钙血症的患者占27%),这些患者中有31.8 %使用了含钙的磷结合剂和/或活性维生素D.比较未经干预治疗的14例血钙低的患者和58例血钙不低的患者,发现低血钙患者的二氧化碳结合力水平明显降低(P<0.05);两组在年龄、血磷、血肌酐及iPTH水平方面差异无统计学意义.(2)在100例患者中,81%存在高磷血症;(3)iPTH＜100 ng/L的患者占18%,iPTH＞300 ng/L的患者占46%,前者的主要病因是慢性肾小管间质病变,后者的主要病因是慢性肾小球肾炎(除去使用含钙的磷结合剂和/或活性维生素D的患者).两组在年龄、血钙、血磷及酸中毒方面差异无统计学意义.多因素回归分析显示校正后血钙水平与iPTH水平呈负相关(r=-0.275,P＝0.006).结论: ESRD患者高血磷表现突出,近50%的患者伴发继发性甲状旁腺功能亢进.血钙水平除了受应用含钙的磷结合剂和/或活性维生素D影响外,还与酸中毒有关.

目的:通过基因表达的差异分析,筛选良性与恶性葡萄胎间的分子标志,以探讨侵袭性葡萄胎早期诊断的方法和可能性.方法:采用mRNA差异显示、斑点杂交和DNA重组、测序等技术对良性与恶性葡萄胎差异表达的基因片段进行筛选和序列测定,通过和基因库数据对比,明确所获基因片段是否为已知序列. 结果:筛选出28条侵袭性葡萄胎高表达的基因片段,其中20个可再扩增,斑点杂交分析确认有13个片段在侵袭性葡萄胎中高表达,克隆其中3个片段,经序列测定和NCBI数据库的BLAST检索比对,发现16号片段序列(IHM-F16)未见记载,为新发现的表达基因片段,并已被NCBI数据库所收录(dbEST_Id:10875704;GenBank_Accn:BM403211),其他两个片段为已知的序列.结论:良性与恶性葡萄胎间基因表达存在明显差异,差异基因的检测分析对侵袭性葡萄胎的早期诊断具有潜在意义.

目的:初步建立子宫内膜癌雌激素受体亚型α(estrogen receptor α, ERα)弱表达细胞模型,探讨ERα在子宫内膜癌发病机制中的作用,研究17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)及三苯氧胺(tamoxifen, TAM)在子宫内膜癌发病过程中与ERα的关系。方法:设计针对ERα的反义寡核苷酸 (antisense oligodexyribonucleotides, AS-ODN),转染入子宫内膜癌HEC-1B细胞,Western blot 测定转染后细胞ERα的表达;检测转染反义寡核苷酸后E2和TAM对子宫内膜癌细胞生长影响的变化。结果: (1)针对ERα翻译启动区设计的反义寡核苷酸可以选择性下调ERα的表达。 (2) E2和TAM可以促进子宫内膜癌细胞系HEC-1B的生长。转染ERα-AS-ODN后可抑制E2对子宫内膜癌细胞HEC-1B的促生长作用,这种抑制作用以转染后的24,48及72 h尤为明显。转染ERα-AS-ODN可抑制TAM对子宫内膜癌细胞HEC-1B的促生长作用,这种抑制作用在转染后的48 h最为明显。结论: 初步建立了ERα弱表达的子宫内膜癌细胞模型。反义核酸技术可以作为一种有效的特异性下调子宫内膜癌细胞中ERα的实验手段。在HEC-1B细胞中,ERα抑制E2和TAM的促进子宫内膜癌细胞生长的作用。

目的: 探讨2型糖尿病一级亲属不同糖耐量状态下病理生理和临床特征,评估胰岛素分泌和胰岛素抵抗在2型糖尿病发病中的作用。方法: 对888例既往无糖耐量异常病史的2型糖尿病患者的一级亲属进行口服75 g葡萄糖耐量实验(OGTT)、糖化血红蛋白(Hba1c)和血脂测定。用胰岛素抵抗指数(HOMAIR)评估胰岛素抵抗;用胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)评估基础胰岛素分泌;用OGTT中空腹和30 min胰岛素血糖差值的比值(ΔI30/ΔG30)评价胰岛素早期分泌;用ΔI30/ΔG30/ HOMAIR评估处置指数(desposition index, DI)。结果: 888例患者的一级亲属中,167例新诊断糖尿病,180例空腹血糖受损或糖耐量减低(糖调节受损),457例OGTT和HbA1c均正常,84例HbA1c高于正常而OGTT正常。从OGTT和HbA1c均正常经糖调节受损到糖尿病状态,HOMAIR、体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)和甘油三酯(TG)进行性增加,HOMA-β、ΔI30/ΔG30、 DI和高密度脂蛋白(HDL)进行性下降。根据OGTT曲线下面积三分位值,将正常糖耐量个体从低到高分为3组(1/3,2/3,3/3组),也发现上述指标相似的变化趋势。调整了性别、年龄、BMI后,高分位3/3组HOMAIR高于低分位1/3组,而HOMA-β、ΔI30/ΔG30/、DI低于低分位1/3组。结论: 2型糖尿病一级亲属胰岛素抵抗和β细胞功能下降是2型糖尿病发生发展中重要的病理生理改变,在诊断糖尿病和糖调节受损前即已出现并伴有明显的脂代谢异常。

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对慢性粒细胞性白血病细胞系K562细胞核基质蛋白的影响. 方法:用DNA梯度电泳观察As2O3作用后K562细胞凋亡的情况.单向、双向电泳观察As2O3对K562细胞核基质蛋白分布影响. 结果:2.5 μmol/L As2O3处理72 h后,DNA电泳已能检测到发生凋亡的K562细胞,但早在As2O3处理48 h时, 即能观察到核基质蛋白分布的改变,此时尚不能观察到凋亡特征性的DNA片段梯形条带.双向电泳可检测出200多个核基质蛋白点,其中约18个点与As2O3处理相关. 结论:As2O3对K562细胞的影响是时间和剂量依赖性的.双向电泳检测As2O3对K562核基质蛋白分布的影响较DNA梯度电泳检测更为敏感.核基质蛋白成分可能是砷作用的靶蛋白,并且可能是药物发挥抗癌作用的关键点之一.

目的:应用核糖体基因(rDNA)序列对甄氏外瓶霉进行分型研究.方法:试验菌株包括甄氏外瓶霉及其变种20株(模式株、标准株、临床及自然分离株),丛梗孢外瓶霉8株,威尼克外瓶霉1株(标准株及临床和环境分离株),疣状瓶霉1株.煮沸冷冻法提取DNA,常规PCR扩增核糖体基因及其转录间隔区,应用DNA多序列分析等方法进行研究.结果:甄氏外瓶霉核糖体基因及其转录间隔区变异较大,DNA序列分析显示,不同来源、不同致病性的甄氏外瓶霉可分为7型,个别菌种与其他甄氏外瓶霉的遗传距离较大.结论:甄氏外瓶霉核糖体基因及其转录间隔区序列变异较大,个别菌株的归属有待于进一步研究.

目的:探讨无辅助单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type-1,HSV-1)载体的包装及其介导LacZ基因在体外培养神经元表达的作用, 解决该载体系统在包装及体外培养神经元应用中的有关问题.方法:将一组含HSV-1基因组的粘粒以限制性内切酶Pac Ⅰ酶切、纯化后,与含LacZ和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及神经微丝(neurofilament,NF)嵌合启动子的HSV-1质粒DNA在脂质体作用下,共转染2-2细胞;在34 ℃条件下培养72 h,收获病毒颗粒.将含病毒颗粒的上清液,加入BHK细胞培养液中,继续培养24 h后,加X-gal染液作用4 h,观察表达LacZ基因的蓝染细胞.取培养第3天的胚胎大鼠大脑皮层神经元,加入含病毒颗粒的培养液,过夜后更换新鲜培养液,分组继续培养1,7和14 d,进行X-gal染色,光镜下观察.结果:包装形成的病毒颗粒感染BHK细胞,24 h后可见表达LacZ基因的蓝染细胞;感染培养第3天的皮层神经元,继续培养1,7和14 d后均可见蓝染神经元.结论:无辅助病毒包装系统能够使含TH-NF嵌合启动子的HSV-1载体形成有效的病毒颗粒,并且在体外培养神经元中持续稳定地表达外源基因,为在神经系统进行基因转移和基因功能研究提供了有效的工具.

目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白(HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据.方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL-1和IL-2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞.分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7/ADR非致死温度热冲击42 ℃ 1 h,继续培养4 h,24 h,48 h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7/ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后4 h,HSP70在MCF7/ADR表达提高了6倍,在MCF7表达提高了22倍,超过了耐药株.药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7/ADR.热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7/ADR细胞.热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了86.23%,超过了对MCF7/ADR的杀伤活性(提高了30.32%).结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性.HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响.

目的:研究溃疡性结肠炎结肠黏膜及粪便中钙卫蛋白含量与疾病活动性的关系,以及临床使用粪便钙卫蛋白作为炎症活动性标志物的可能性.方法:选取溃疡性结肠炎患者42人和正常对照20人,采用抗钙卫蛋白单克隆抗体对结肠黏膜的钙卫蛋白进行免疫组化分析,同时采用ELISA方法测定粪便中钙卫蛋白含量.溃疡性结肠炎组织学严重程度根据Truelove-Witts标准判断.结果:免疫组化染色显示活动期溃疡性结肠炎的结肠黏膜中有不同强度的钙卫蛋白表达,表达强度与组织学严重程度显著相关(r=0.89,P=0.000 1);缓解期结肠黏膜无或仅有微弱的表达,缓解期与活动期相比差异有统计学意义(P<0.01).ELISA方法测定结果显示,粪便钙卫蛋白含量与结肠黏膜的钙卫蛋白表达强度呈显著相关(r=0.90,P=0.000 7),并且粪便钙卫蛋白含量与组织学严重程度亦显著相关(r=0.849,P<0.01).结论: 溃疡性结肠炎结肠黏膜中的钙卫蛋白可以反映炎症的组织学严重程度,也是粪便中钙卫蛋白的来源,因此检测粪便中的钙卫蛋白可以反映炎症的组织学严重程度.该检测方法简便可行.

目的: 探讨抑酸药兰索拉唑对幽门螺杆菌Helicobacter pylori(简称H.pylori)在胃内分布的影响.方法: 检查43例有H.pylori感染的十二指肠溃疡患者在服用兰索拉唑前后的胃镜活检组织切片,活检部位分别为窦小弯及体大弯,对活检组织切片做HE及Warthin-Starry嗜银染色,观察窦体两部位H.pylori检出率、密度及胃炎活动程度的变化.结果: (1)窦小弯用药前、用药后4周及3个月H.pylori的检出率分别为93.02%,58.14%和86.05%,用药后4周H.pylori检出率及密度明显低于用药前及用药后3个月(均P<0.01).(2)体大弯用药后4周和3个月H.pylori的密度较用药前增加.(3)窦小弯用药后4周胃炎活动性的检出率明显低于用药前及用药后3个月,胃炎活动程度也轻于后两者.(4)体大弯用药后4周和3个月胃炎活动性检出率较用药前增加,胃炎活动程度也加重.(5)窦小弯及体大弯用药前后胃炎活动性与H.pylori检出率之间变化呈正相关(分别为r=0.995 1,r=0.960 8).结论: 兰索拉唑可使幽门螺杆菌在胃内的定植部位发生改变,窦小弯H.pylori检出率下降、密度减少,而体大弯密度增加,此种影响在用药后1个月左右最为明显,胃炎活动性与H.pylori检出率的变化关系密切.

目的:对小鼠尾静脉单次推注普鲁泊福后,观察其血清中普鲁泊福质量浓度和脑组织中普鲁泊福质量比的变化,测定脑组织中的普鲁泊福消除半衰期.方法:选择小鼠140只,以32 mg/kg的剂量,单次推注普鲁泊福.按照给药后1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,15,30,45和60 min,分为14组,每组10只,摘取眼球,取动脉血,断头取全脑.采用高效液相色谱检测法测定普鲁泊福含量,并计算脑组织的消除半衰期.结果:小鼠静脉单次推注普鲁泊福后血清的达峰时间为1 min,脑组织的达峰时间为3 min.脑组织的消除半衰期为(9.6±0.5) min.结论:脑组织中的峰浓度滞后于血清中的峰浓度.脑组织的消除半衰期能更直接地反应普鲁泊福在效应室的消除状态.

目的:获取成年无鼾男性人群的上气道及周围组织形态的核磁共振数据,为相关呼吸疾患人群提供对比资料.方法:从453名男性志愿者中选取83名无鼾者,青年组(22～29岁)30人,中青年组(36～45岁)31人,中老年组(46～57岁)22人.所有志愿者在严格固位条件下进行核磁共振扫描.利用核磁共振设备的固有软件及特定公式进行测量和计算.结果:获得上气道各段及周围组织形态的线距、面积和体积共93项测量指标.结论: 建立了3个年龄段的无鼾男性人群上气道及周围组织形态的均值和变异范围.

目的:探讨使P504S、P63、CD10 、Ki-67抗原抗体复合物在免疫组化检测中获得高表达的抗原修复条件.方法:取前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和人乳头状瘤病毒感染的外阴上皮组织,用10%(体积分数)中性缓冲甲醛固定液固定.用EnVision二步法行免疫组化染色, P504S、P63、CD10、 Ki-67分别作为前列腺癌、良性前列腺增生、乳腺增生组织和感染人乳头状瘤病毒的外阴上皮组织的一抗,使用统一的EnVisionTM二抗.每种组织皆分别使用3种不同的缓冲液进行抗原修复:pH 6.0的枸橼酸缓冲液、pH 8.0的乙二氨四乙酸二钠(EDTA)缓冲液和pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液.对每一种抗原修复液,应用4个不同的抗原修复时间:12 min、20 min、25 min和30 min.染色完成后,镜下对比不同条件下抗原抗体复合物表达的情况.结果:P504S在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复20 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;P63在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复30 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高; Ki-67在pH 9.0的EDTA-Tris缓冲液中修复25 min阳性信号最强,阳性细胞比率最高;CD10在不同pH值的缓冲液中修复20 min或25 min效果相同,都能得到最强表达.结论:不同的抗原有其各自最适合的抗原修复液、pH值范围和最适修复时间.相对来说, 高pH值的EDTA-Tris缓冲液的修复效果要优于低pH值的修复液.

目的: 建立视网膜小胶质细胞培养、纯化和鉴定的方法,以观察视网膜小胶质细胞活化后的形态和功能变化,探讨活化的小胶质细胞在糖尿病视网膜病变时的可能作用. 方法: 以细菌内毒素脂多糖(LPS)活化小胶质细胞,通过免疫细胞化学及con-focal显微镜技术、流式细胞术、MTT、ELISA等方法观察视网膜小胶质细胞形态、数量和功能的变化. 结果: 视网膜小胶质细胞纯度在96%以上,LPS激活的小胶质细胞发生形态改变,CD11b表达上调,释放细胞因子TNF-α,而细胞数量无明显改变. 结论: 从细胞免疫表型、纯度、形态学和分泌功能等方面都证明,本方法是一种稳定、高效的小胶质细胞分离纯化方法.

目的:优化高效液相色谱(HPLC)法检测大鼠心肌组织腺苷酸的含量.方法:ODS HYPERSIL C18分析柱,检测波长254 nm,流动相为50 mmol/L磷酸钾缓冲液(pH 6.5).结果:心肌三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)平均回收率分别为99%～107%,96%～104%和95%～119%;日内和日间相对标准偏差(RSD)分别在1.5%和5.1%以下.结论:优化高效液相色谱法快速准确、简便易行.

目的:从自然界中分离鉴定产3α-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达3α-HSD.方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定.为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的3α-HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力.结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为85%,最适生长pH值为7.0,最佳生长温度为30 ℃.在E.coli. BL21(DE3)pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为29×103 具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α-羟类固醇)脱氢.结论:从池塘泥浆中分离到一株产3α-HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合3α-HSD.这为利用金属螯和亲和层析纯化融合3α-HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础.

目的:对细胞系中支原体的感染情况进行检测并分型.方法:利用支原体16S～23S保守区域扩增来检出细胞系中支原体感染率,并利用16S～23S保守区间的间隔区(spacer)长度不同进行巢式PCR扩增,结合测序达到分型的目的.结果:在检测的22株细胞系中,有77.3%(17株)的细胞系有支原体感染,其中5株有2种或2种以上支原体感染,在分布上以M.fermentans和M.hyorhinis支原体多见.结论:支原体在细胞系中的高感染率提示,在以细胞系作为模型的研究中,对支原体感染所造成的影响应有充分认识.检测及分型技术的建立为进一步研究不同型别支原体的致病力提供了可能.