目的:探讨孕早期胎儿染色体异常的产前筛查方案.方法: 采用时间分辨荧光免疫法(TRFIA)对孕11～14周的2 739例孕妇血清中的人绒毛促性腺激素β亚单位(β-hCG)、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)进行检测,同时利用腹式或阴道B型超声波测量胎儿颈部半透明膜(NT)厚度,筛查出22例染色体异常胎儿(通过羊水细胞染色体核型分析明确诊断),比较分析22例染色体异常胎儿与870例对照组三种标记物水平.结果: 病例组NT和β-hCG值明显较对照组高,PAPP-A值明显比对照组低,差异有统计学意义,三项指标联合筛查,胎儿染色体异常检出率为91.67%,假阳性率为11.16%. 结论: 孕早期NT+β-hCG+PAPP-A三联筛查方案对孕早期产前筛查胎儿染色体异常有较好的实用价值.

目的:早期诊断先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism,CH)患儿,预防智力低下儿的发生.方法:采用时间分辨荧光免疫法测定促甲状腺素(thyroid-stimulating hormone,TSH)浓度,如果TSH筛查呈阳性,则使用化学发光免疫法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)测定血清TSH、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxin,FT4),并结合临床确诊.结果:湖南省1997年4月至2003年12月106 224份标本中共检出CH患儿68例,检出率1/1 562,明显高于全国平均水平(1/3 009).结论:(1)新生儿筛查是早期诊治CH患儿,预防CH发生智力低下的关键;(2)湖南为CH高发地区;(3)检出率与科学技术的发展呈相关性,累加检出率能更真实地反映发病率;(4)选择适当切值有助于防止漏筛.

目的:建立同步多色荧光原位杂交技术在外周血、羊水及单个胚胎细胞及骨髓细胞等样本中的实验方法,探索其在细胞遗传学、产前诊断、胚胎种植前诊断以及在血液病中的应用. 方法: 取外周血淋巴细胞、羊水细胞和不适于胚胎移植及冷藏的受精胚胎细胞、骨髓细胞分别制片,用相应的荧光标记的探针进行原位杂交,荧光显微镜取图分析. 结果:建立获得稳定可行的各类标本的实验方法. 结论:应用多色荧光原位杂交技术可对染色体进行快速准确的诊断,并可应用于产前诊断和胚胎种植前诊断及血液病的诊断.

目的:研究PAX6基因突变与脑结构异常的关系.方法:应用核磁共振成像技术,对一个由PAX6 c1080C→T突变引起无虹膜的家系中18名患者和6名正常人进行脑结构扫描.结果:该家系大部分PAX6基因突变患者表现出不同程度的脑质退化变性、胼胝体变薄萎缩和嗅球萎缩等脑结构的异常,其中有一例病人还表现出Chiari 畸形的影像学特征.结论:进一步证实了PAX6基因突变能够引起人脑结构异常.

目的: 对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨.方法:针对β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突变位点区域采用二重巢式PCR,分别以不同的引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用98 ℃预变性扩增单个淋巴细胞和/或单卵裂球,了解这些因素对PCR扩增效率的影响.结果: 不同的引物浓度组中,终浓度为0.25 μmol/L R1+F1引物对与 0.3 μmol/L R2+F2引物对配对扩增效率最高;不同的Taq DNA聚合酶中TaKaRa EX Taq的扩增效率最高;中和缓冲液-1(200 mmol/L Tricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的扩增效率(P<0.05);单细胞PCR反应前采用98 ℃预变性与不采用98 ℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义.结论:不同引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异,而PCR反应前采用98 ℃预变性不能提高PCR扩增效率.

目的: 研究北京地区1 200例汉族人群线粒体脂肪酸氧化代谢中的三功能蛋白酶(mitochondrial trifunctional protein,MTP)α亚单位的长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(long chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,LCHAD)G1528C基因的突变频率.方法: 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术分析1 200例汉族正常产妇脐血MTP的α亚单位G1528C基因突变携带情况.实验以西方人种的G1528C杂合子标本为阳性对照,同时设立阴性和空白对照作为实验技术质控标准.结果: 1 200例汉族产妇脐血标本G1528C 基因经PCR-RFLP突变筛查检测后,未见有与阳性对照标本相对分子质量相同的条带出现.结论: 中国人群与白种人之间可能存在着种族差异,西方人种中常见的MTPα亚单位的G1528C基因突变可能不是中国人种中常见的突变位点.

目的:了解MTHFR C677T、MS A2756G、MTHFD G1958A和CBS 844 ins68bp位点在中国北方正常人群中的基因型分布,并评价单一或复合位点基因变异与叶酸、维生素B12、同型半胱氨酸(Hcy)水平及先天性心胖病(CHD)的关系.方法:选择辽宁省192例CHD患者及其父母作为病例组,同一地区年龄、性别匹配的124名正常人及其父母作为对照组,采用PCR-RFLP方法检测其基因型,放射免疫法和荧光偏振免疫法测定血清叶酸、维生素B12和Hcy水平,比较两组差异.结果:中国北方正常人群中,这四个位点的突变等位基因频率分别为MTHFR 51.18%, MS 7.58%, MTHFD 24.32%, CBS插入频率 2.36%;CBS 844 ins68bp位点杂合型频率病例组明显高于对照组(子代为12.57% 和 2.97%, 父亲为10.88% 和 3.09%,母亲为11.54% 和 1.02%),子代的OR值为4.70 (95% CI 1.34～25.15),父亲的OR值为3.83 (95% CI 1.05～20.98),母亲的OR值为12.65 (95% CI 1.92～532.47),其他三个位点两组差异无统计学意义;MTHFR、CBS和MTHFD三个位点联合基因变异的母亲、MTHFR 和 CBS两个位点联合基因变异的母亲(OR=8.44,95%CI:1.23～362.26)、MTHFD 和 CBS两个位点联合基因变异的母亲在病例组中所占的比例明显高于对照组;病例组父亲和母亲的血清叶酸水平明显高于对照组;病例组母亲的血清Hcy水平高于对照组,但差异无统计学意义;MTHFR 和 MTHFD两个位点为纯合型者的血清叶酸和维生素B12水平轻微下降,而血清Hcy水平轻微上升;联合基因变异使血清叶酸、维生素B12和Hcy水平出现下降趋势.结论:这四个位点的基因多态性存在着种族和地区差异,CBS 844 ins68bp位点突变可能是CHD发生的一个危险因素,亲代(尤其是母亲)的插入突变可使其后代发生CHD的危险性升高.

目的:检测细胞标志蛋白及P53在子宫内膜癌细胞的表达,探讨它们参与不同亚型子宫内膜癌发病的可能机制,分析其与肿瘤生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学法检测131例子宫内膜癌患者不同亚型、不同临床分期及不同分化程度的子宫内膜细胞中CK7,Vim及P53的表达.结果:CK7及Vim的表达分别与P53的表达存在正相关性.内膜样腺癌细胞中CK7表达高于其他类型,而Vim及P53的表达降低.Vim的表达与临床分期呈正相关;Vim及P53的表达阳性率随细胞分化级别上升而增加,具有相关性.结论:CK7、Vim、P53的编码基因可能通过转录水平的相互调控机制参与不同亚型子宫内膜癌发生及发展过程,CK7,Vim及P53可作为判断肿瘤的预后及选择治疗方案有用的参考指标.

目的:探讨微粒体环氧化物水解酶基因(microsomal epoxide hydrolase gene,EPHX1)139位点多态性和谷胱甘肽转硫酶theta1基因(the glutathione S-transferase theta1 gene,GSTT1)多态性对新生儿低出生体重的影响.方法:采用病例对照调查方法,使用统一设计的调查问卷,由经过培训的调查员于1998年至1999年在安徽省安庆市各县级医院对入院分娩孕妇及其单胎、活产的低出生体重儿和正常出生体重的对照新生儿进行调查,共得到246个母亲-新生儿对,其中低出生体重组73对, 正常出生体重对照组173对,用PCR-RFLP方法确定基因型.结果:EPHX1 His139His纯合子基因型与His139Arg杂合子基因/Arg139Arg纯合子基因型比较, GSTT1缺失基因型与存在基因型比较,多因素Logistic回归模型在经混杂因素(母亲年龄、文化程度、生育史、新生儿性别、孕周)调整前后,均未见导致低出生体重的危险性有显著性增加.进一步分析EPHX1139位点多态性和GSTT1位点多态性之间对低出生体重的影响,结果显示GSTT1缺失基因型和EPHX1His139His纯合子基因型之间有明显联合作用,导致低出生体重的危险因素增加(OR＝3.46, P=0.035).结论:基因EPHX1 139位点多态性和GSTT1位点多态性对低出生体重的影响有明显联合作用.

目的:分析影响儿童青少年的胰岛素敏感性的遗传和环境因素,并探讨其中体质指数(body mass index, BMI)、年龄和性别的作用.方法:选择5～18岁同性别双生子296对,平均年龄(12.4±3.5)岁,其中同卵双生子(MZ)223对,异卵双生子(DZ)73对.在DNA卵性鉴定基础上,应用Mx软件模型拟合分别计算BMI调整前后稳态模型胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment insulin resistance index, HOMA IR)和β细胞功能指数(HOMA β-cell function index,HBCI)的遗传度,并检验年龄和性别对于模型的作用.结果:HOMA IR与年龄、性别和BMI相关,HBCI与年龄相关,遗传分析HOMA IR、HBCI的模型为ACE,BMI调整前后HOMA IR男女生遗传度不同,HBCI无明显变化.调整后HOMA IR、HBCI遗传度分别为0.25、0.24.结论:儿童青少年人群中HOMA IR、HBCI受遗传和环境因素共同作用,环境因素的影响似乎更大;BMI是影响机体胰岛素敏感性的重要因素;年龄和性别对遗传度的影响可能不大.