北京大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 45 ›› Issue (2): 297-.

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DNA印迹法和实时定量PCR法在端粒长度测定中的应用比较

高凌云,李国栋,童坦君△   

  1. (北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系,北京大学衰老研究中心,北京100191)
  • 出版日期:2013-04-18 发布日期:2013-04-18

  • Online:2013-04-18 Published:2013-04-18

摘要: 目的:分析并比较测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法在细胞衰老实际研究中的性能。方法:从不同代数(population doublings,PDs)的正常人成纤维细胞(2BS)中提取基因组DNA作为测试样本;对测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法进行优化,以点杂交的方式分析地高辛配基标记检测系统的特异性和灵敏度;分别用两种方法反复测定同一样本的平行样或不同样本并分析比较两种方法测量端粒的分辨率和精确度。结果:实际测量端粒时,地高辛配基标记检测系统虽可检测出小于1 μg的基因组DNA,但最优样本量为4~5 μg;DNA印迹法的分辨率约为150 bp,实时定量PCR法的分辨率约为300~400 bp,前者可分辨代龄相差少至2 PDs的2BS细胞端粒长度的差异,而后者只能分辨代龄相差5 PDs以上的端粒差异;实时定量PCR法重复测量误差超过10%,远大于DNA印迹法的2.5%(P<0.001)。结论:地高辛配基标记的DNA印迹检测系统完全适用于测量端粒长度,且性能优于实时定量PCR法,但后者方便快捷,可高通量处理样本,所以在细胞衰老研究中,应根据具体情况合理选择相应方法。

关键词: 端粒, 印迹法, DNA, 实时定量聚合酶链反应, 地高辛配基, 衰老

[1] 程晓静,蒋栋,张连海,王江华,李雅真,翟佳慧,闫宝琪,张露露,谢兴旺,李子禹,季加孚. KRAS G12V特异性T细胞受体治疗恶性肿瘤的临床前研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(5): 884-895.
[2] 戴菊华,孙新平,张捷,石连杰. 巨细胞病毒核酸和抗体检测在不同特征患者中的一致性分析及临床指导意义[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(2): 267-271.
[3] 娄雪,廖莉,李兴珺,王楠,刘爽,崔若玫,徐健. 类风湿关节炎患者外周血TWEAK基因启动子区甲基化状态及其表达[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(6): 1020-1025.
[4] 候越,赵旭彤,谢志颖,袁云,王朝霞. 线粒体DNA 8344 A>G突变导致的MELAS/MERRF/Leigh重叠综合征[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(5): 851-855.
[5] 王兆年,高文静,王碧琦,曹卫华,吕筠,余灿清,逄增昌,丛黎明,汪华,吴先萍,刘彧,李立明. 成年双生子空腹血糖、糖化血红蛋白与全基因组DNA甲基化的相关性研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(3): 425-431.
[6] 王嘉禹,赵美萍. 荧光分析法测定人体血液样品中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)的活性[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(3): 487-492.
[7] 刘洋,高岩,陈学杰,华红. 脱落细胞DNA 定量分析在口腔潜在恶性疾病诊断中的准确性[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(1): 16-20.
[8] 吴震天,高文静,王碧琦,曹卫华,吕筠,余灿清,逄增昌,丛黎明,汪华,吴先萍,李立明. 成年双生子血压水平与DNA甲基化相关性研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(3): 387-394.
[9] 邓会,马骏凡,景子洋,梁耀先,阿拉塔,刘洋,邱晓彦,王悦. 免疫球蛋白A在人肾小球系膜细胞中的合成与分泌[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(6): 948-953.
[10] 张晓威,兰轲,杨文博,李清,赵永平,殷华奇,Kite Brandes,白文俊,徐涛. 跨膜蛋白CMTM2在人睾丸和精子中的表达及定位[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(4): 575-579.
[11] 董颖,周梅,巴晓军,司婧文,李文婷,王颖,李东,李挺. 子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B的表达特点与临床意义[J]. 北京大学学报(医学版), 2016, 48(5): 788-794.
[12] 陈志强,王莹,米贤军,陈昂,黄华勇,钟守军,邓文同,刘超凡,徐秀梅,代新珍. 聚羟基丙烯酸和Van-clear替代传统试剂在FISH法检测宫颈hTERC基因中的应用比较[J]. 北京大学学报(医学版), 2016, 48(2): 356-360.
[13] 曹婕, 金建秋, 邓大君, 刘宏伟. 白斑、扁平苔藓及口腔癌中人类乳头瘤病毒的检测[J]. 北京大学学报(医学版), 2016, 48(1): 84-88.
[14] 司婧文, 王莉, 巴晓军, 张旭, 董颖, 张继新, 李文婷, 李挺. Lynch综合征临床病理筛查2例及文献回顾[J]. 北京大学学报(医学版), 2015, 47(5): 858-864.
[15] 张文晓, 尚静, 郜鑫, 栾先国, 李苹, 王天晶, 胡贵平, 朱彤, 贾光. 1,4-萘醌老化黑碳对人支气管上皮细胞活性氧和DNA链断裂的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2015, 47(4): 690-696.
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