北京大学学报(医学版) ›› 2014, Vol. 46 ›› Issue (5): 669-675.
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马靖,裴晓磊,张扬,王应△
MA Jing, PEI Xiao-lei, ZHANG Yang,WANG Ying△
摘要: 目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary, CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMP-myc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株。以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95%以上且具有生物学活性。结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具。
[1] | 李志昌,侯云飞,周之伟,姜龙,张舒,林剑浩. 影响全膝关节置换术患者术前预期的患者因素[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(1): 170-176. |
[2] | 李佳,徐钰,王优雅,高占成. 老年流感肺炎的临床特征及D-二聚体与疾病严重程度的相关性[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(1): 153-160. |
[3] | 周传香,周正,张晔,刘晓筱,高岩. 28例口腔基底样鳞状细胞癌的临床病理分析[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(1): 62-67. |
[4] | 孙玉春,郭雨晴,陈虎,邓珂慧,李伟伟. 口腔精准仿生修复技术的自主创新研发与转化[J]. 北京大学学报(医学版), 2022, 54(1): 7-12. |
[5] | 刘梅歌,方朴,王严,丛璐,范洋溢,袁远,徐燕,张俊,洪道俊. 远端型遗传性运动神经病8例的临床、病理及遗传学特点[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(5): 957-963. |
[6] | 敖明昕,李学民,于媛媛,时会娟,黄红拾,敖英芳,王薇. 视觉重建对老年人行走动态足底压力的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(5): 907-914. |
[7] | 郭应禄. 夯实人才培养,实现我国泌尿外科奋斗目标[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(4): 633-634. |
[8] | 尤鹏越,刘玉华,王新知,王思雯,唐琳. 脱细胞猪心包膜生物相容性及成骨性能的体内外评价[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(4): 776-784. |
[9] | 刘承,马潞林. 前入路机器人辅助前列腺根治性切除术中改善排尿控制的经验[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(4): 635-639. |
[10] | 郝瀚,刘越,陈宇珂,司龙妹,张萌,范宇,张中元,唐琦,张雷,吴士良,宋毅,林健,赵峥,谌诚,虞巍,韩文科. 机器人辅助前列腺癌根治术后患者的控尿恢复时间[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(4): 697-703. |
[11] | 彭顺壮, 付茜茜, 冯星淋. 中国中老年居民教育程度与失能发生:社会参与的中介作用[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(3): 549-554. |
[12] | 林瑜,吴静依,蔺轲,胡永华,孔桂兰. 基于集成学习模型预测重症患者再入重症监护病房的风险[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(3): 566-572. |
[13] | 李远骋, 崔闻心, 郭雪儿, 朱璠, 刘思辰, 贾碧波, 汪培, 马迎华. 青年学生男男性行为人群中人类免疫缺陷病毒阳性与阴性者获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)相关知识与行为比较[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(3): 511-517. |
[14] | 刘晓强,杨洋,周建锋,刘明月,谭建国. 成年人后牙失去邻牙合接触后的三维位置变化[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(3): 594-597. |
[15] | 陈平,黎泽明,郭怡,孙昕霙,Edwin B.FISHER. 基于大五人格理论应用潜在剖面分析探究2型糖尿病患者的用药依从性[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(3): 530-535. |
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