摘要： 目的：建立一种新的荧光标记的钠离子-葡萄糖协同转运蛋白2（sodium-glucose cotransporter 2，SGLT2）葡萄糖转运的测定方法。方法：合成人全长SGLT2 cDNA，构建pIRES2-EGFP-SGLT2重组质粒，酶切鉴定并测序验证其构建的正确性。瞬时转染HEK293细胞后，构建SGLT2高表达细胞株；采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪检测其转染效率及转录活性，Western Blot 法检测目的蛋白SGLT2表达情况。以荧光标记的脱氧葡萄糖2-NBDG作为示踪剂，应用流式细胞术检测SGLT2对葡萄糖的转运活性。 结果：构建的pIRES2-EGFP-SGLT2质粒经酶切鉴定、测序证明质粒构建正确。该质粒转染HEK293细胞后，与未转染组相比，转染组细胞绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）表达明显增加（P<0.01）。与空载体pIRES2-EGFP转染组相比，重组质粒转染组SGLT2蛋白表达明显增加（P<0.05）；而未转染组与空载体转染组SGLT2蛋白表达无明显差异。SGLT2转运试验结果显示，转染组细胞对2-NBDG的钠离子依赖性摄取率较未转染组明显升高（P<0.01）。结论：成功构建并应用SGLT2真核表达质粒，建立了一种新的荧光示踪的SGLT2葡萄糖转运活性的测定方法。