含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达

摘要/Abstract

摘要： 目的：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力，构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒，并探讨其稳定性。方法：设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物，扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段，并将包装位点-5位的U替换为C，提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体，连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3，转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒，用超声破碎、纯化获得表达产物，鉴定并讨论其稳定性。结果：成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒，其可耐受DNA酶和RNA酶的降解，并在-20 ℃、4 ℃、室温25 ℃下10 d保持稳定。结论：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力，可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒，本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性，为轮状病毒实时荧光定量逆转录PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。

关键词: 轮状病毒属, 基因, NSP3, 病毒粒子, 核糖核酸酶类

常乐, 张括 , 张瑞 , 谢洁红 , 李金明 , 王露楠. 含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达[J]. 北京大学学报（医学版）, 2012, 44(5): 737-741.

CHANG Le, , ZHANG Kuo, ZHANG Rui, XIE Jie-Hong, LI Jin-Ming, WANG Lu-Nan. [J]. Journal of Peking University(Health Sciences), 2012, 44(5): 737-741.

参考文献

相关文章 15

[1]	朱小玲,李文静,王宪娥,宋文莉,徐莉,张立,冯向辉,路瑞芳,释栋,孟焕新. 细胞色素B-245α链及胆固醇酯转运蛋白基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎易感性的关系[J]. 北京大学学报（医学版）, 2022, 54(1): 18-22.
[2]	刘梅歌,方朴,王严,丛璐,范洋溢,袁远,徐燕,张俊,洪道俊. 远端型遗传性运动神经病8例的临床、病理及遗传学特点[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(5): 957-963.
[3]	张梅香,史文芝,刘建新,王春键,李燕,王蔚,江滨. MLL-AF6融合基因阳性急性髓系白血病的临床特征及预后[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(5): 915-920.
[4]	冯科,倪菁菁,夏彦清,曲晓伟,张慧娟,万锋,洪锴,张翠莲,郭海彬. 3例SUN5基因变异导致无头精子症的遗传学分析和助孕治疗结局[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(4): 803-807.
[5]	郭子宁, 梁志生, 周仪, 张娜, 黄捷. 基于国际疾病分类的心血管疾病亚型的基因组学研究[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(3): 453-459.
[6]	周川, 马雪, 邢云昆, 李璐迪, 陈洁, 姚碧云, 傅娟玲, 赵鹏. 基于肿瘤基因组图谱数据库探索性筛选潜在泛癌生物标志物[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(3): 602-607.
[7]	赵凯,常志芳,王志华,庞春艳,王永福. 基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4的表达对胶原诱导关节炎小鼠肺间质病变的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(2): 235-239.
[8]	刘建,王宪娥,吕达,乔敏,张立,孟焕新,徐莉,毛铭馨. 广泛型侵袭性牙周炎患者牙根形态异常与相关致病基因的关联[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(1): 16-23.
[9]	吴君怡,余淼,孙仕晨,樊壮壮,郑静蕾,张刘陶,冯海兰,刘洋,韩冬. 少汗性外胚层发育不良患者EDA基因突变检测及表型分析[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(1): 24-33.
[10]	高鹏,雒艳萍,李俊峰. B/C基因型的乙型肝炎病毒对不同免疫阶段慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞及其亚群的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(6): 1153-1156.
[11]	刘滕飞,林涛,任利辉,李广平,彭建军. CMTM5基因与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究及机制探讨[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(6): 1082-1087.
[12]	李文咏,王梦莹,周仁,王斯悦,郑鸿尘,朱洪平,周治波,吴涛,王红,石冰. 中国人群Hedgehog通路基因与非综合征型唇腭裂的亲源效应[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(5): 809-814.
[13]	王梦莹,李文咏,周仁,王斯悦,刘冬静,郑鸿尘,李静,李楠,周治波,朱洪平,吴涛,胡永华. WNT代谢通路相关基因与中国人群非综合征型唇腭裂发病风险的交互作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(5): 815-820.
[14]	柳小珍,李莹莹,杨丽萍. 全外显子组测序和目标序列靶向捕获测序在遗传性视网膜变性基因诊断中的差异[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(5): 836-844.
[15]	胡双,杨丽萍. 不同血清型腺相关病毒载体转染小鼠视网膜后的表达效率[J]. 北京大学学报（医学版）, 2020, 52(5): 845-850.

Metrics

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed

本文评价

推荐阅读 10

[1]	万有, , 韩济生, John E. Pintar. 孤啡肽基因敲除小鼠电针镇痛作用增强[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(3): 376 -379 .
[2]	张燕, 韩志慧, 钟延丰, 王盛兰, 李玲玲, 郑丹枫. 骨骼肌活组织检查病理诊断技术的改进及应用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(4): 459 -462 .
[3]	赵奇, 薛世华, 刘志勇, 吴凌云. 同向施压测定自酸蚀与全酸蚀粘接系统粘接强度[J]. 北京大学学报（医学版）, 2010, 42(1): 82 -84 .
[4]	林红, 王玉凤, 吴野平. 学校生活技能教育对小学三年级学生行为问题影响的对照研究[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(3): 319 -322 .
[5]	丰雷, 程嘉, 王玉凤. 注意缺陷多动障碍儿童的运动协调功能[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(3): 333 -336 .
[6]	李岳玲, 钱秋瑾, 王玉凤. 儿童注意缺陷多动障碍成人期预后及其预测因素[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(3): 337 -340 .
[7]	. 书讯[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(3): 225 -328 .
[8]	牟向东, 王广发, 刁小莉, 阙呈立. 肺黏膜相关淋巴组织型边缘区B细胞淋巴瘤一例[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(4): 346 -350 .
[9]	韩金涛, 赵军, 栾景源, 张龙. 多发结核性腹主动脉瘤一例[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(4): 361 -364 .
[10]	常杏芝, 卢红梅, 张月华, 秦炯. 以高血压与红斑肢痛为主要表现的汞中毒一例[J]. 北京大学学报（医学版）, 2007, 39(4): 377 -380 .