含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达

摘要/Abstract

摘要： 目的：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力，构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒，并探讨其稳定性。方法：设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物，扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段，并将包装位点-5位的U替换为C，提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体，连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3，转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒，用超声破碎、纯化获得表达产物，鉴定并讨论其稳定性。结果：成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒，其可耐受DNA酶和RNA酶的降解，并在-20 ℃、4 ℃、室温25 ℃下10 d保持稳定。结论：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力，可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒，本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性，为轮状病毒实时荧光定量逆转录PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。

关键词: 轮状病毒属, 基因, NSP3, 病毒粒子, 核糖核酸酶类

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