小鼠重组釉蛋白基因稳定表达细胞系的建立

北京大学学报（医学版） ›› 2008, Vol. 40 ›› Issue (2): 151-154.

小鼠重组釉蛋白基因稳定表达细胞系的建立

娄雅莉,孙樱林,赵铁强,刘国庆,冯海兰

(1.北京大学口腔医学院口腔医院修复科,北京 100081;2.北京大学心血管研究所基因转移与基因治疗实验室)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-04-18 发布日期:2008-04-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-04-18 Published:2008-04-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:构建小鼠重组釉蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系.方法:取初生小鼠牙胚组织,提取 RNA,用 RT-PCR 技术扩增釉蛋白基因片段,经双酶切后克隆至真核表达载体 pcDNA3.1^TM/myc-His(-)B 上, 转化大肠杆菌E.coli DH5α, 中提质粒,将该重组表达质粒转染至 HEK 293A 细胞,用 G418 筛选出阳性克隆,并检测釉蛋白的表达水平.结果:通过测序表明,小鼠釉蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上.将该表达系统转染 HEK 293A 细胞后,进行 Western Blot 检测,证明其中有相对分子质量约 32 000 的釉蛋白表达.结论:成功构建了小鼠重组釉蛋白真核表达载体,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础.

关键词: 牙釉质蛋白质类, 基因表达, 细胞系, 小鼠

娄雅莉, 孙樱林, 赵铁强, 刘国庆, 冯海兰. 小鼠重组釉蛋白基因稳定表达细胞系的建立[J]. 北京大学学报（医学版）, 2008, 40(2): 151-154.

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