北京大学学报(医学版) ›› 2010, Vol. 42 ›› Issue (4): 480-484.

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用DAPI和Hoechst33342染色法检测DNA的流式细胞方法探讨

刘锡娟△*,丁慧荣*,张宏

  

  1. (北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所中心实验室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142)
  • 收稿日期:2009-11-30 修回日期:2010-04-27 出版日期:2010-08-18 发布日期:2010-08-18
  • 通讯作者: 刘锡娟

  • Received:2009-11-30 Revised:2010-04-27 Online:2010-08-18 Published:2010-08-18

摘要:

目的:探索利用DAPI和Hoechst33342两种荧光染料检测DNA的流式细胞技术。方法:分别用DAPI、Hochest和PI 3种荧光染料标记HT-29细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较3种方法测定结果。用标准荧光微球和DNA 质量控制试剂盒做测试质控。结果:质控实验显示,紫外激光的变异系数(CV)为2.4;DAPI和Hoechst33342标记的小鸡红细胞核(chicken erythrocyte nuclei,CEN)出现4个峰,第2、第3和第4峰所在道数的平均值与第1峰的比值为2、3、4,且第1峰的CV均为2.4。DAPI、Hoechst33342标记小牛胸腺细胞核(calf thymocyte nuclei ,CTN)出现2个峰,G2/G1为1.97,且G0/G1峰的CV为2.4。DAPI、Hoechst33342和PI 3种染料标记的HT-29细胞呈现完整的细胞周期峰,结果分别为CV值 3.40、3.02和4.42,G0/G1期含量为60.86%、60.22%和60.81%,S期含量为28.85%、29.70%和29.82%,G2/M期含量为10.29%、9.09%和9.37%,3种标记法测定结果一致。 结论:本文探索的DAPI和Hoechst33342标记法简单易行,可作为具备紫外激光器的流式细胞仪的首选DNA荧光染料。

关键词: 染色与标记, 流式细胞术, DNA, 细胞周期

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