北京大学学报(医学版) ›› 2016, Vol. 48 ›› Issue (1): 170-174. doi: 10.3969/j.issn.1671-167X.2016.01.031
葛雯姝1,汤祎熳2,张晓2,刘云松2,周永胜2△
GE Wen-shu1, TANG Yi-man2, ZHANG Xiao2, LIU Yun-song2, ZHOU Yong-sheng2△
摘要:
目的:构建一种可用于评价人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells, hASCs)成骨向分化的荧光素酶报告系统,以期能够快捷、特异且定量的检测出细胞在体外的成骨向分化情况,并且使将来活体监测小型实验动物外源移植细胞的成骨分化成为可能。方法:将骨钙素(osteocalsin, OC)基因的启动子克隆到荧光素酶luciferase报告基因的上游,构建pLVX-OCpro -Luc-Puro载体,进行慢病毒包装后感染人脂肪间充质干细胞,嘌呤霉素(puromycin)筛选阳性克隆,获得稳定整合OCpro-Luc-Puro的细胞株,将该细胞在成骨诱导培养基中培养的第7和14天,观察其在成骨诱导环境下分化的情况。在成骨诱导培养的第7和14天检测荧光素酶的活性,同时进行茜素红(Alizarin red S)染色定量及成骨相关基因表达水平的检测,通过比较验证该荧光素酶报告系统用于成骨评价的可行性。结果:成功构建pLVX-OCpro-Luc-Puro 载体获得稳定整合报告基因的hASCs细胞株。在OCpro-Luc-Puro-hASCs成骨诱导的第7和14天,茜素红钙化结节染色结果均为阳性,且第14天的染色及定量结果明显强于第7天。OC、Runx2及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因的mRNA水平在成骨分化刺激下,其表达水平逐渐上升,同时,荧光素酶被激活,且荧光素酶的活性在第14天明显强于第7天,即荧光素酶表达的趋势与茜素红染色定量及成骨相关基因表达水平一致。结论:成功构建了一种可用于评价成骨向分化的荧光素酶报告系统,并通过与传统的检测成骨向分化方法(茜素红染色定量、成骨相关基因表达)对比,验证了该系统的有效性。
中图分类号:
[1] | 杜文瑜,杨静文,姜婷. 甲磺酸去铁胺促进大鼠颅骨临界骨缺损血管化骨再生的早期连续观察[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(6): 1171-1177. |
[2] | 尤鹏越,刘玉华,王新知,王思雯,唐琳. 脱细胞猪心包膜生物相容性及成骨性能的体内外评价[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(4): 776-784. |
[3] | 张胜男,安娜,欧阳翔英,刘颖君,王雪奎. 生长停滞特异性蛋白6在人牙周膜细胞迁移及成骨分化中的作用[J]. 北京大学学报(医学版), 2021, 53(1): 9-15. |
[4] | 白向松,吕珑薇,周永胜. Tribbles同源蛋白3抑制人脂肪间充质干细胞成脂向分化[J]. 北京大学学报(医学版), 2020, 52(1): 1-9. |
[5] | 谢静,赵玉鸣,饶南荃,汪晓彤,方滕姣子,李晓霞,翟越,李静芝,葛立宏,王媛媛. 3种口腔颌面部来源的间充质干细胞成血管内皮分化潜能的比较研究[J]. 北京大学学报(医学版), 2019, 51(5): 900-906. |
[6] | 刘霞,李英妮,孙晓麟,彭清林,卢昕,王国春. 去整合素金属蛋白酶对成骨分化的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(6): 962-967. |
[7] | 刘爽,郭雨龙,杨静逸,王维,徐健. 间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮有效性的meta分析[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(6): 1014-1021. |
[8] | 隋华欣,吕培军,王勇,冯驭驰. 低能量激光照射对人脂肪来源干细胞/海藻酸钠/明胶三维生物打印体成骨能力的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(5): 868-875. |
[9] | 王子成,程立,吕同德,苏黎,林健,周利群. 炎症因子预处理的脂肪干细胞可明显抑制外周血单个核细胞增殖[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(4): 590-594. |
[10] | 张苏杰,赵卫红,于路平,殷华奇,张晓威,李清,刘士军,徐涛. 伴多发淋巴结肿大的乏脂型血管平滑肌脂肪瘤并发术后顽固性淋巴瘘1例报道及文献回顾[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(4): 717-721. |
[11] | 刘婧寅,陈飞,葛严军,魏菱,潘韶霞,冯海兰. 选择性激光熔化种植体对早期骨矿化沉积率的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(1): 117-122. |
[12] | 张伟,庞春艳,王永福. 脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(6): 974-978. |
[13] | 杨瑞莉, 余婷婷, 周彦恒. 乙酰水杨酸对牙龈干细胞免疫调节功能的促进作用[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(5): 872-877. |
[14] | 隋华欣, 吕培军, 王宇光, 王勇, 孙玉春. 低能量激光照射对人脂肪基质细胞增殖分化的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(2): 337-343. |
[15] | 姜蔚然,张晓,刘云松,吴刚,葛严军,周永胜. 骨形态发生蛋白-2-磷酸钙共沉淀支架与人脂肪间充质干细胞构建新型组织工程化骨[J]. 北京大学学报(医学版), 2017, 49(1): 6-015. |
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