北京大学学报(医学版) ›› 2014, Vol. 46 ›› Issue (2): 278-283.

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牙龈卟啉单胞菌感染内皮细胞导致白介素-8表达升高的胞内机制初探

吴迪*,欧阳翔英△,万蒙   

  1. (北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京100081)
  • 出版日期:2014-04-18 发布日期:2014-04-18

Intracellular mechanisms of  Porphyromonas gingivalis induced interleukin-8 upregulation in endothelial cells

WU Di*, OUYANG Xiang-ying△, WAN Meng   

  1. (Department of Periodontology, Peking University School and Hospital of Stomatology, Beijing 100081, China)
  • Online:2014-04-18 Published:2014-04-18

摘要: 目的:探讨在牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)感染血管内皮细胞过程中引起白细胞介素(interleukin,IL)-8表达升高的胞内机制。方法:厌氧培养Pg,原代培养人脐静脉血管内皮细胞,用RNA干扰技术分别制作核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(nucleotide binding oligomerization domain-containing protein 1, NOD1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体2(NOD-containing protein 2, NOD2)基因沉默的内皮细胞模型,用Pg感染正常的和基因沉默的内皮细胞,ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-8水平,RT-PCR检测IL-8、NOD1、NOD2的mRNA和蛋白表达水平,Western blot法检测NOD1、NOD2的蛋白表达水平。用NOD1和NOD2的激动剂DAP和MDP分别激活内皮细胞,并检测IL-8、NOD1、NOD2的mRNA和蛋白表达水平。结果:正常人脐静脉血管内皮细胞受Pg感染后IL-8的mRNA和蛋白表达高于未感染的细胞,NOD1、NOD2表达亦均上调;NOD1、NOD2基因分别沉默的内皮细胞模型在受Pg感染后,其IL-8表达的mRNA和蛋白水平明显低于Pg感染的正常内皮细胞(P<0.01);NOD1和NOD2激动剂(DAP/MDP)激活内皮细胞后,IL-8表达的mRNA和蛋白表达水平均上调(P<0.05)。结论:Pg可诱导正常人脐静脉内皮细胞IL-8表达上调,NOD1和NOD2作为胞内模式识别受体在其中发挥重要作用。

关键词: 白细胞介素-8, 牙龈卟啉单胞菌, 内皮细胞

Abstract: Objective:To find out the mechanisms by which Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) regulates interleukin (IL)-8 expression in endothelial cells. Methods: P. gingivalis was applied to infect human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), and the expressions of nucleotide binding oligomerization domain (NOD) 1, NOD2 and IL-8 were detected at mRNA and protein levels. Then the NOD1/NOD2 gene was silenced by RNA interference targeting NOD1 or NOD2 mRNA, followed by P. gingivalis treatment in the HUVECs, and the expression levels of NOD1/NOD2 and IL-8 were examined by real-time PCR, Western-blot or ELISA. In order to confirm the relationship between NOD1/NOD2 and IL-8 in the HUVECs, the agonists for NOD1 and NOD2, DAP and MDP were used in this study. Results: P. gingivalis was activated the expressions of NOD1 and NOD2 in the HUVECs. Meanwhile, IL-8 expression level was also upreguated after P. gingivalis treatment (P<0.01). Knocking down of NOD1 or NOD2, the expression level of NOD1 or NOD2 was decreased, and P. gingivalis-induced IL-8 expression was attenuated in the HUVECs (P<0.01). Compared with normal cells, the NOD1 and NOD2 agonists, DAP and MDP, successfully increased IL-8 expression respectively (P<0.05). Conclusion: NOD1 and NOD2 play an important role in the inflammation of HUVECs caused by P. gingivalis in the expression of IL8.

Key words: Interleukin-8, Porphyromonas gingivalis, Endothelial cells

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