氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖

北京大学学报（医学版） ›› 2009, Vol. 41 ›› Issue (3): 335-342.

氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖

耿燕1，李涛2，胡晓青1，张晨光1，陈苹1，马康涛1，周春燕1△

(1北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系，北京100191； 2浙江师范大学化学与生命科学学院生物系)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-06-18 发布日期:2009-06-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-06-18 Published:2009-06-18

摘要/Abstract

摘要：

目的：研究氧化还原因子1 (redox factor 1, REF1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其可能的机制。方法：为证实REF1在乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用，构建重组Ref1野生型和突变型的腺病毒载体，感染乳鼠心肌成纤维细胞。通过RT-PCR和Western 印迹检测Ref1以及与胶原合成相关的基因表达的改变，通过免疫荧光检测REF1核转位，利用MTT和流式细胞仪分析细胞增殖和细胞周期，用电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)检测REF1对转录因子活化蛋白1 (activator protein 1, AP1)的DNA结合能力的影响。利用含25 mmol/L的葡萄糖培养基模拟高糖环境，观察对乳鼠心肌成纤维细胞增殖及REF1表达与活性的影响。结果： MTT比色法显示，感染野生型Ref1重组腺病毒的细胞在490 nm处的光密度值明显高于对照病毒组（0.671±0.044 vs 0.364±0.007，n=6，P<0.01）。流式细胞仪对细胞周期的分析表明，野生型Ref1能明显增加S期细胞的百分率（16.8%±0.62% vs 9.04%±0.43%，n=3，P<0.05）。RTPCR检测发现，野生型Ref1促进细胞Ⅰ型胶原(collagen I, Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ, Col Ⅲ) mRNA表达增多，但突变型Ref1对细胞的增殖和胶原的合成均没有明显影响。EMSA实验结果显示，感染野生型Ref1重组腺病毒的细胞AP1的DNA结合能力增强。高糖培养基培养乳鼠心肌成纤维细胞同样能增强AP1的DNA结合能力。高糖培养虽然对Ref1的表达水平没有影响，但增强了细胞中REF1的核转位，促进了细胞的增殖。结论：REF1促进乳鼠心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成，其机制可能是通过上调AP1的DNA结合能力。

关键词: 关键词氧化还原因子1, 成纤维细胞, 细胞增殖, 胶原

耿燕, 李涛, 胡晓青, 张晨光, 陈苹, 马康涛, 周春燕. 氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(3): 335-342.

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