目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧+NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧+NaHS组比较,低氧+NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.

目的:探讨河南省安阳地区人群干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF-3)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与食管癌发生的关联.方法:提取安阳地区152例食管癌患者及当地食管拉网普查个体191例外周血基因组DNA,用PCR方法扩增IRF-3基因含Codon 96、194、377、427这4个多态性位点的片段,并采用DNA直接测序法明确个体基因型,用x2检验计算多态性分布频率.结果:IRF-3基因Codon96、194、377处3个多态性位点在安阳人群中没有多态性,Codon 427位点在安阳正常人群与安阳食管癌患者两组间差异有显著性,0R=2.38(95%CI=1.15～4.95,P＜0.05).结论:IRF-3基因Codon 427的多态性增加食管癌发生的易感性,在增加食管癌的发病风险性方面,C等位基因约是G等位基因的2.38倍.

目的:探讨胃肠B细胞淋巴瘤(B cell lymphoma,BCL)的临床病理特点、不同组织学分型胃肠,BCL肿瘤细胞增殖与凋亡情况,以及BCL与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)的关系.方法:用免疫组化方法进行肿瘤组织学分类、HP的表达、细胞增殖性及凋亡相关因子检测;末端转移酶生物素标记法[TdT(terminal deoxynucleotidyl transferase)dUTP nick end-labeling,TUNEL]检测细胞凋亡数.结果:57例胃肠BCL中,MALT淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)15例(胃9例,肠6例),弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)42例(胃28例,肠14例).MALT和DLBCL的平均凋亡指数(apoptotic index,AI)分别为O.16%和2.54%,平均增殖指数(proliferation index,PI)分别为2.22%、8.71%,p53的阳性表达率分别为6.7%和35.7%,并且PI值(P=0.026)及p53(P=O.044)差异有显著性;而Bcl-2的阳性表达率分别为60.0%、35.7%,HP的阳性率分别为66.7%、23.8%,且差异有显著性(P=0.005).结论:HP与胃肠MALT淋巴瘤关系密切.DLBCL的细胞凋亡和增生活性较MALT高,MALT Bcl-2的高表达可能与其低凋亡率有关.p53促进凋亡,p53基因突变可能在MALT向DLBCL转化过程中起一定的作用.抗HP抗体免疫组化染色必要时可以用于胃肠BCL中的HP检测.

目的:研究一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂对遗传性视网膜变性视细胞凋亡的影响.方法:测定出生后不同鼠龄RCS(Royal College of Surgeons)大鼠视网膜的诱生型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)活性;出生后第17天RCS大鼠玻璃体腔内注射NOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸(Nω-nitro-L-arginine,N-Arg),并于出生后第22、27和32天重复注射,于出生后第38天以TUNEL法检测视网膜视细胞凋亡.结果:RCS大鼠出生后第25天,视网膜iNOS活性达高峰;注射N-Arg后,视网膜TUNEL阳性视细胞核相对面积显著降低,外核层明显增厚,杆锥层显著变薄.结论:一氧化氮合酶抑制剂对遗传性视网膜变性具有潜在的临床治疗价值.

目的:探讨乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对大鼠海马细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的影响.方法:原代混合培养海马细胞;利用激光共聚焦扫描显微镜观察Ach作用后细胞内游离钙的变化;用荧光染料的刮除负载法检测Ach作用后GJIC的变化.结果:Ach(0.05～0.10 mmol/L)可引起海马细胞内钙离子浓度变化.共聚焦扫描显微镜观察显示Ach作用后细胞内钙离子浓度升高,该变化大小依赖于Ach浓度,并能被东莨菪碱拮抗.荧光染料的刮除负载法检测发现细胞与0.05 mmol/L Ach共同孵育60h后GJIC明显增强.结论:Ach使细胞间由缝隙连接介导的细胞间通讯明显增强.

目的:研究维拉帕米对甲基苯丙胺(MA)导致神经细胞损伤的影响,探讨维拉帕米的保护机制.方法:采用MTT法,乳酸脱氢酶(LDH)法,观察MA的神经毒性作用.运用DNA电泳法、流式细胞仪法,观察MA致神经细胞凋亡的作用,并研究了维拉帕米的保护作用.结果:(1)MA(0.25～3.00mmol/L)作用48 h和60h,能增加大鼠小脑神经细胞系R2细胞LDH的漏出率,分别为48.2%～89.3%和62.5%～97.3%,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.01),活细胞明显减少;应用流式细胞仪检测,在G1峰前出现亚二倍体峰,MA所致R2细胞凋亡呈一定的时间依赖性和剂量依赖性.DNA电泳图谱则表现出典型的梯状条带.(2)维拉帕米(0.5～5.0 μmol/L)减少MA导致的R2细胞LDH的漏出率,改善细胞形态,对MA诱导R2细胞凋亡有明显的抑制作用.结论:维拉帕米对MA诱导的神经细胞凋亡具有保护作用,MA神经毒性作用可能与L型电压依赖性钙通道有关.

目的:探讨共患与不共患学习困难(1earning disorder,LD)的儿童注意缺陷多动障碍(attention deficit hy-peractivi disorder,ADHD)与5-HT2c受体基因(HTR2C)C-759T和G-697C两种多态之间的关联.方法:检测189个共患LD的ADHD核心家系(ADHD+LD)和299个不共患LD的ADHD核心家系(ADHD-LD)的C-759T和G-697C两种多态,并对各等位基因和单体型进行传递不平衡检验(TDT).结果:在ADHD-LD家系中,-759C(x2=6.961,P=0.008)和-697G(x2=8.346,P=0.004)等位基因优先传递,就单体型而言,-759C/697G传递较多(x2=9.000,P=0.002 7),而-759T/-697C传递较少(x2=7.784,P=0.0053);但是,在ADHD+LD家系中未发现任何等位基因和单体型的传递不平衡现象.结论:ADHD共患LD与否在HTR2C基因C-759T和G-697C两种多态水平上有明显的遗传差别.HTR2C基因与ADHD-LD相关联.

目的:探讨注意缺陷多动障碍儿童(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)注意网络的特点.方法:以25例符合DSM-Ⅳ诊断标准的ADHD门诊患儿,以及按年龄、性别和智商配对的25名正常儿童为研究对象;采用神经心理测试软件ANT(attentional networks test)对其觉醒、指向及执行控制三种注意网络的效率进行测试与比较.结果:(1)ADHD组的总体正确率(91.2±9.5)%明显低于正常对照组(97.0±2.9)%,差异有高度显著性(P=0.006).(2)ADHD组执行控制网络项效应量(118±38)ms明显高于对照组(93±28)ms,差异有显著性(P=0.012).(3)未发现ADHD组与正常对照组的觉醒和指向两个注意网络存在差异.结论:本研究提示ADHD儿童可能存在执行控制网络缺陷.

目的:探讨IL-lra对体外发育不同阶段神经元惊厥性损伤的拮抗作用及可能机制.方法:以培养的发育中皮层神经元为研究对象,MTT代谢率观察神经元损伤,激光共聚焦显微镜扫描检测神经元[Ca2+]i,real-time定量RT-PCR方法测定NMDAR mRNA表达.结果:(1)IL-1ra预处理后再给无镁+IL-1ra处理,与同期单纯无镁组比较,6 d的神经元MI T代谢率无明显改变,而17 d的神经元显著增高.(2)IL-1ra预处理后,6 d、17 d的神经元[Ca2+]i峰值显著低于同期单纯无镁组,但拮抗[Ca2+]i增高的作用在6d的神经元较17d的神经元更明显.(3)IL-lra预处理后,6 d、17 d的神经元NR1 mRNA表达有所降低,且IL-1ra降低不同培养时间NR1 mRNA的作用差异无显著性;用IL-1ra后17d神经元的NR2A mRNA表达降低,与同期对照组比较差异无显著性,而6 d神经元NR2A mRNA表达仍高于同期对照组;IL-1ra对不同培养时间NR2B mRNA均无明显降低作用.结论:IL-1ra对神经元惊厥性损伤的保护作用有一定的年龄依赖性.这种保护作用可能通过减轻细胞内Ca2+超载及其它机制实现.

目的:研究甲基化结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,mecp2)基因在发育中正常Wistar大鼠大脑皮层表达水平的变化.方法:应用实时定量PCR(real-time PCR),Northern印迹杂交对mecp2基因在正常Wistar大鼠发育的不同阶段:胚胎第15天(E15)、第17天(E17)、第19天(E19)、出生当日(P0),生后第7天(P7)、生后第14天(P14)、生后第28天(P28),成年期大鼠mRNA的表达水平进行定性、定量分析;应用Western印迹杂交对MeCP2的表达水平进行半定量分析.结果:mecp2基因是在正常Wistar大鼠大脑皮层中表达的mRNA,约为10kb.从胚胎至成年期的发育过程中,mecp2基因mRNA的表达虽有波动,但差异无显著性.mecp2基因在正常Wistar大鼠大脑皮层中仅表达一种MeCP2,相对分子质量为75 000.在不同发育阶段其表达水平表现为,胚胎E15表达水平最低,自胚胎E19始至成年期MeCP2表达水平较E15明显增高.生后第7日至成年期,各时间点间表达水平的变化差异没有显著性.结论:随着正常Wistar大鼠大脑皮层神经元的发育成熟,MeCP2的表达水平逐渐增高,说明MeCP2对神经元的成熟有重要作用,并可能与维持神经元的成熟状态有关.

目的:研究不同麻醉方式对应激反应、凝血和纤溶功能的影响.方法:实施全子宫切除的30例患者随机分为3组:连续硬膜外麻醉组(组E,n=10),硬膜外麻醉联合全身麻醉组(G+E,n=10)和单纯全麻组(G组,n=10).硬膜外麻醉的阻滞平面采用7.5g/L的布比卡因维持在T6到L3,术后行患者自控硬膜外镇痛(PCEA),全身麻醉采用常规方法完成,术后行患者自控性镇痛(PCA).分别在麻醉前(T0)、术毕(T1)和术后第24小时(T2)、第72小时(T3)采集血样测定儿茶酚胺浓度、凝血和纤溶参数.结果:E组和G+E组患者的去甲肾上腺素(NE)水平在围术期没有明显变化,但在G组患者却显著高于基线值(P<0.01)和其它两组患者(P<0.05).在T1时,3组患者的肾上腺素水平均明显高于T0并达到峰值(P<0.01),然后在T3恢复正常.3组患者的纤维蛋白原水平(FIB)在T1明显降低(P<0.01),但术后快速升高并在T3达到最高(P<0.01).在T3时G+E组和G组患者的FIB水平明显高于E组患者(P<O.05).G+E组和G组患者在T1时的凝血酶原-抗凝血酶原Ⅲ复合物(TAT)含量比组E患者明显增高(P<0.01),术后则恢复至麻醉前水平,而组E患者的TAT水平在术后继续下降且明显低于基线值和其它两组(P<0.05).围术期组E患者的D-二聚体(DD)含量比基线值明显增加(P<0.05),并且3组患者的DD水平在T2达到峰值(P<0.01).3组患者在T1的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)水平比T0明显增加(P<0.01),E组患者在术后则恢复正常,但G组和G+E组患者的t-PA水平在术后第72小时显著下降,并且明显低于E组患者(P<0.01).围术期G组和G+E组患者纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)水平显著上升,且高于组E患者(P<0.01).结论:硬膜外麻醉通过对外科应激和PAI-1的抑制效应以及其它机制保护下腹部外科术后患者的纤溶功能;这种血栓预防效应仅发生于单纯硬膜外麻醉术后.

目的:获得1A6/DRIM的N端特异性抗体并对其在细胞内的定位进行分析.方法:针对1A6/DRIM的N端多肽用多通道同步固相全自动合成系统合成,以无免疫原性的赖氨酸结构为核心偶联,将此多聚抗原肽(mutiple antigenic peptides,MAPs)免疫新西兰大白兔,从免疫兔血清中获得1A6/DRIM的多克隆抗体.结果:用Western Blot技术证明了1A6/DRIM的N端抗体,与C端特异性单克隆抗体识别相同的1A6/DRIM基因表达的310 000蛋白条带,经过Western Blot和免疫荧光的方法初步证实1A6/DRIM在多种胃癌细胞系、乳腺癌细胞系以及肝癌细胞系中表达,免疫荧光显示1 A6/DRIM主要定位在细胞核内.结论:对于用谷胱苷肽巯基转移酶(Glutathion-S-transferase,GST)融合蛋白方法不能诱导表达的蛋白,可利用合成MAPs制备抗原的方法获得抗体.本研究用此方法制备的抗体特异性识别1A6/DRIM蛋白产物并证明该基因主要在多种肿瘤细胞的核内表达.

目的:观察应用5-HT4受体部分激动剂替加色罗(tegaserod)对大鼠直肠扩张反应的影响和脊髓神经元性一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化,探讨替加色罗对内脏感觉的影响机制.方法:应用新生大鼠(生后第8～21天)醋酸灌肠建立慢性内脏高敏模型为H组;生理盐水灌肠为C组.H组又分为H-saline、H-vehicle、H-Teg 0.1、H-Teg 0.3和H-Teg 1.0组;C组分为C-saline和C-Teg 1.0组.H-saline和C-saline组腹腔注射生理盐水,H-vehicle组注射溶剂+蒸馏水,H-Teg0.1、H-Teg0.3和H-Teg 1.0组分别注射替加色罗0.1 mg/k、0.3 mg/kg、1.0 mg/kg,C-Teg1.0组注射替加色罗1.0 mg/kg,10 min后直肠扩张观察腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),并用NADPH-d黄递酶法观察腰骶髓(L6～S1)nNOS的表达.结果:替加色罗明显抑制高敏组AWR,但在对照组的作用不明显.1.2 mL扩张时,替加色罗(1.0 mg/kg)使高敏组AWR积分低于对照组AWR积分.替加色罗(1.0 mg/kg)可以明显减少高敏组脊髓nNOS阳性细胞总数(减为H-saline的40%,P<0.01),在背角nNOS减少的最明显(为H-saline的31%).替加色罗(0.1 mg/kg)不影响脊髓nNOS总数,但可以使中央管区nNOS减为H-saline的79%(P<0.01).结论:替加色罗可抑制内脏高敏大鼠直肠扩张反应,并呈剂量依赖性减少腰骶髓nNOS的表达,尤其是在脊髓背角和中央管区作用更明显,提示脊髓nNOS可能参与了替加色罗对内脏敏感性的调节作用.

目的:检测趋化素样因子2(chemokine-like factor 2,CKLF2)mRNA在心肌肥厚大鼠心肌中的表达.方法:实验组以手术缩窄大鼠腹主动脉致心肌肥厚,对照为假手术组;应用竞争PCR方法检测两组左心室CKLF2mRNA表达差异.结果:与假手术组相比,手术组术后早期(第17天)心肌中CKLF2mRNA表达增高,第45天时降到假手术组水平.结论:CKLF2mRNA在心肌肥厚早期表达增加.

目的:探讨白细胞介素-9(IL-9)在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)气道炎症中的作用.方法:分别对30例COPD稳定期患者(A组)、31例哮喘缓解期患者(B组)、15例正常对照者(C组)进行诱导痰检查,用夹心酶联免疫吸附法测定诱导痰上清液IL-9、IL-5、IL-8浓度;采用免疫组织化学SP法染色及图象分析技术测定IL-9阳性细胞百分数及含量.结果:A、B组IL-9浓度与C组差异有显著性.IL-9阳性细胞主要分布在巨噬细胞的胞浆内,A、B组IL-9阳性细胞百分数与C组差异有显著性(x2=20.821、19.908,P均<0.001).A组中性粒细胞百分数、IL-8水平明显高于B、C组;A组IL-9与巨噬细胞呈正相关(r=0.407,P=0.039).结论:IL-9在COPD患者较正常人明显增高,且与气道内的巨噬细胞、IL-8水平有关,可做为COPD气道炎症的又一检测指标.

目的:了解凋亡基因PDCD5在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithe1ial neoplasia,CIN)和宫颈鳞癌中的表达,分析PDCD5在宫颈癌的发病中所起的作用.方法:采用免疫组织化学的方法,对93例宫颈组织(其中包括正常宫颈18例,CIN I级19例、CINⅡ级18例、CINⅢ级20例、宫颈癌18例)的组织切片进行PDCD5的免疫组化染色.采用人工阅片评分及计算机辅助染色强度判定2种方法判断宫颈组织PDCD5的染色阳性率及染色强度.采用单因素方差分析法判断PDCD5的表达与正常宫颈、CIN、宫颈鳞癌的相关性.结果:免疫组织化学的结果显示,在正常宫颈及CIN I级组织中,PDCD5表达多呈强阳性,CINⅡ级以上及宫颈癌组织表达呈递减趋势.正常宫颈组织、CIN各级及宫颈癌组织之间PDCD5的平均光密度值分别为0.322、0.366、0.287、0.252和0.206,各级病变之间差异均有显著性.在整体上说,PDCD5的表达在CIN I级较正常升高,在CINⅡ级以上随宫颈病变的进展呈下降趋势.结论:PDCD5可能在不同程度上参与了宫颈细胞从CIN至宫颈癌进程中的调控.

目的:观察在非体外循环冠状动脉旁路移植术中使用国产自体-3000型血液回收机(北京京精医疗设备公司)回收处理后的红细胞体内半衰期的变化.方法:选取2003年11月至2004年1月期间20例在我科连续行择期非体外循环冠状动脉旁路移植手术的患者随机分为实验组(血液回收组)和对照组(非血液回收组).实验组患者术中使用国产自体-3000型血液回收机回收术野失血,在血液回收处理完毕后立即取血样.对照组患者在麻醉诱导成功后经中心静脉导管取血样作为对照.使用核素51Cr标记法测量红细胞的体内半衰期.结果:实验组经血液回收处理的红细胞和对照组未经血液回收处理的红细胞在体内半衰期差异无显著性.结论:在非体外循环冠状动脉旁路移植术中,使用国产自体-3000型血液回收机(北京京精医疗设备公司)回收处理后的红细胞体内半衰期没有显著的变化.

目的:总结4例原位心脏移植术体外循环(extracorporeal circulation,ECC)经验.方法:4例均采用中低温,中、高流量灌注.术中注重心、肺、肾等重要器官及血液的保护.切取供心前灌注4℃改良St.Thomas液使其迅速停搏.供心离体后,用5 000 mL冷生理盐水冲洗心腔后经主动脉根部灌注4℃威斯康星大学溶液(University of Wisconsin solution,UW液)1 000 mL,放入冰生理盐水内保存.吻合全程中供心表面置冰屑,左心房内滴注冷生理盐水.结果:ECC时间(133.3±13.1)min,供心热缺血时间为1～3 min,冷缺血时间为(142.0±28.2)min.4例心脏均自动复跳,术后1月左室射血分数为60%～65%.1例因急性排异反应术后第150天猝死,其余3例目前存活.结论:良好的ECC管理,注重各重要器官功能及供心心肌保护是心脏移植手术成功的重要因素.

目的:考察常用吸收促进剂的鼻黏膜毒性.方法:采用测定黏膜纤毛持续运动时间、测定黏膜纤毛输送速率和考察黏膜形态3种方法评价了7种[十二烷基硫酸钠(SDS),去氧胆酸钠(SDC),苄泽35(Brij35),吐温80(Tween 80),乙二胺四乙酸钠(EDTANa2),2-羟丙基-β-环糊精(2-Hp-β-CD),卵磷酯(lecithin)]常用的吸收促进剂的鼻黏膜毒性.结果:对纤毛持续运动时间的影响1%SDS>1%SDC>1%Brij35>5%Tween80>0.1%EDTA>5%HP-β-CD>1%lecithin.对纤毛输送速率的影响1%Brij35>1%SDC>1%SDS>0.1%EDTA>1%lecithin>5%Tween80>5%HP-β-CD.黏膜形态学考察毒性1%SDS≈1%SDC≈1%Brij35>5%Tween80>0.1%EDTA≈5%HP-β-CD≈1%lecithin.以上浓度均为质量分数.结论:3种评价鼻黏膜毒性方法之间具有很好的相关性.

目的:研究合欢皮的化学成分.方法:用色谱法分离合欢皂苷及皂苷元,用化学和波谱法鉴定结构.结果:分离并鉴定了一个三萜皂苷(1)和四个三萜皂苷元(2～5),化合物1的结构为3-0-[β-D-吡喃木糖(1→2)-β-D-吡喃呋糖(1→6)-β-D-葡萄糖]-21-0[(6S)-2-反式-2羟甲基-6-甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖-2,7-辛二烯酸]-金合欢酸-28-β-D-吡喃葡萄糖(1→3)-[o-L-呋喃阿拉伯糖(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖酯,化合物2,3,4,5的结构分别为金合欢苷元B,合欢三萜内酯甲,剑叶沙酸内酯,金合欢酸甲酯.结论:化合物1为首次从合欢皮中分离得到,即合欢皂苷Prosapogenin-10.

目的:研究经MBTTM托槽系统矫正病例的支抗牙--上颌第一磨牙的三维位置变化;比较一步滑动法和两步滑动法对治疗后牙齿的轴倾度、转矩度和扭转的影响;比较横腭杆(TPA)对矫正后上磨牙轴倾度、转矩度和扭转的影响.方法:对37例上颌后牙需最大支抗的患者应用MBTTM托槽系统进行矫正,其中19例应用一步滑动法,18例应用两步滑动法.所有的病例均采用口外弓加强支抗,其中21例还使用了TPA;利用YM-2115三维测量仪和三维测量软件对患者治疗前后的上颌模型进行测量和重叠测算,得出牙齿矫正后空间位置变化.结果:矫正后上第一磨牙平均前移(4.5±1.1)mm,伸长(1.5±0.9)mm;近中舌向扭转(3±7).(一步滑动法和两步滑动法间差异无显著性;TPA组和非TPA组间差异有显著性);近中倾斜(6±4).(一步滑动法大于两步滑动法,差异有显著性);上磨牙平均发生(3±6).冠颊向转矩(一步、两步滑动法间差异无显著性).结论:应用MBTM托槽系统行拔牙矫治后,上磨牙出现冠颊向转矩、近中扭转和近中倾斜的趋势.矫治过程中,一步滑动法比两步滑动法更容易造成上磨牙的近中倾斜.TPA对抗磨牙扭转的作用较其它作用更为明显.

目的:建立胚胎干细胞的培养系统及培养方法.方法:用免疫溶解法(immunosurgery)分离3.5 d的129SvJ系小鼠囊胚内细胞团,在γ射线照射的胎鼠成纤维细胞饲养层上培养,胰酶消化传代.用组织化学法、免疫组织化学方法识别细胞表面标志,常规G带法行染色体核型分析,在体、离体分别观察细胞的多向分化能力.结果:得到一个单细胞克隆129系小鼠胚胎干细胞系G11能长期稳定增殖不分化,具有正常40XY核型,碱性磷酸酶阳性、SSEA-1阳性,在体和离体条件下可分化为多种细胞.结论:以小鼠为模型成功建立了哺乳动物胚胎干细胞的培养方法和培养系统.

目的:应用培养的CBA/J小鼠脑血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVEC)构建血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的体外实验模型.方法:将BMVEC种植在明胶包被的24孔板细胞插入器的微孔滤膜上培养至汇合状态,通过4 h液面渗漏实验、扫描和透射电镜、血脑屏障形成前后膜两侧的电阻以及辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的通透性和RMP-7对血脑屏障通透性的调控作用来证实BBB的形成.结果:BMVEC培养至汇合后,4 h液面渗漏实验成为阳性;扫描电镜显示细胞形成单层,透射电镜证实细胞间形成紧密连接;跨细胞电阻(the transendothelial electrical resistance,TEER)分别为汇合前和人脐静脉内皮细胞的3.2倍和7.7倍;对HRP的通透率分别为前对照组的13.4%和6.7%;RMP-7处理使HRP在BBB的通透率增加了2.7倍.结论:构建的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性,适用于中枢神经系统药物跨BBB能力的研究.

目的:以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为模型药物,制备一种漂浮性能不受胃中酸度影响的漂浮缓释片剂.方法:根据流体动力学原理,采用漂浮层和载药层分别制粒再一起压片的方法,制备5-Fu双层漂浮型胃内滞留缓释片,并测定其在不同酸度介质中的漂浮动力学及药物释放规律.结果:以优化配方所制备的双层漂浮缓释片在pH 2～7的介质中漂浮性能良好,药物的体外释放可以通过辅料成分的变化进行调节;100 r/min转速下,在0.1 mol/L HCl中,体外药物释放符合一级动力学规律.结论:本研究制备的胃内漂浮滞留缓释片的漂浮性能不因胃内酸度的变化而改变,有希望通过胃内滞留时间的延长在临床用于胃癌的辅助治疗.