北京大学学报(医学版) ›› 2000, Vol. 32 ›› Issue (4): 303-305.

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应用抑制性差减杂交技术克隆小鼠胸腺细胞发育相关新基因

金成刚,李燕,陈慰峰   

  1. ^A北京大学基础医学院免疫学系,北京,100083^B北京大学^C1447
  • 出版日期:2000-08-28 发布日期:2000-08-28

  • Online:2000-08-28 Published:2000-08-28

摘要: 目的:克隆胸腺细胞发育相关新基因.方法:应用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库,结合RACE及RT-PCR进一步克隆并验证新基因的cDNA全长序列.结果:筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因,获得了差异表达的cDNA片段,克隆后挑选阳性克隆进行测序,成功克隆8个新基因片段.对其中两个新基因克隆C55和C91进行Northern杂交分析,mRNA转录体长度分别为1.4 kb及1.5 kb,C55的表达在两种胸腺基质细胞系中存在显著差异.进一步克隆了C55和C91两个新基因的cDNA全长序列,已被GenBank所接受.结论:抑制性差减杂交技术是克隆新基因片段的有效方法;成功克隆8个新基因片段及两个新基因的cDNA全长序列.

关键词: 抑制性差减杂交技术, 克隆, 分子, 胸腺/遗传学, DNA, 环状

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