摘要： 目的:在细胞水平探讨西罗莫司[sirolimus,又名雷帕霉素(rapamycin)]的抗肾纤维化作用.方法:采用原代培养的大鼠肾皮质肌成纤维细胞(myofibmblast,MyoF).实验各时间点分别设对照组和用西罗莫司40 mg/L处理组.将细胞培养12 h,24 h,48 h后分别收集细胞和细胞培养上清液,用Western blot方法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,Col-Ⅰ)和上清液中FN,Col-Ⅰ蛋白水平的表达;用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)法检测细胞培养1 h,2 h,4h,6 h各时间点前胶原Ⅰ(procollagen-Ⅰ)mRNA表达的变化;用明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性.实验结果分别以各时间点对照组作为基线1,计算与对照组的比值.结果:(1)西罗莫司于各个时间点对细胞内α-SMA的表达均无影响.(2)用西罗莫司处理后,于24 h对细胞内Col-Ⅰ蛋白表达量明显少于对照组,并持续至48 h,分别为各时间点对照组的(0.58±0.05)倍和(0.63±0.18)倍,差异有统计学意义(P<0.05).(3)与各时间点对照组相比,细胞内procollagen-Ⅰ mRNA在1 h,2 h时表达均减少,分别为(0.38±0.05)倍和(0.55±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.05),于4 h恢复到基础水平.(4)培养细胞上清液中12 h即有Col-Ⅰ基础表达,经西罗莫司处理24 h其表达量较对照组明显减少,为对照组的(0.59±0.25)倍,差异有统计学意义(P<0.05),持续至48 h仍呈减少趋势.为对照组的(0.52±0.21)倍,P<0.05.(5)细胞内FN蛋白表达趋势与上清液中一致,24 h其表达量较对照组明显减少,分别为对照组的(0.44±0.09)倍和(0.40±0.15)倍,差异均具有统计学意义(P<0.05),48h西罗莫司对FN的抑制作用消失.(6)经西罗莫司处理12 h,24 h和48 h,上清液中MMP-2和MMP-9的活性均无明显变化.结论:西罗莫司可以通过抑制MyoF的Col-Ⅰ和或FN的表达而发挥其抗肾纤维化的作用.
| [1] | 何珊,陈炘,程琦,朱灵江,张培玉,童淑婷,薛静,杜燕. 托法替布通过JAK/STAT3通路抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(3): 505-511. |
| [2] | 蔡天玉,朱振鹏,徐纯如,吉星,吕同德,郭振可,林健. 成纤维细胞生长因子受体2在肾透明细胞癌中的表达及意义[J]. 北京大学学报（医学版）, 2022, 54(4): 628-635. |
| [3] | 郜洪宇,孟焕新,侯建霞,黄宝鑫,李玮. 钙结合蛋白在健康牙周组织和实验性牙周炎组织的表达分布[J]. 北京大学学报（医学版）, 2021, 53(4): 744-749. |
| [4] | 石冰清,袁晓静,赵玉鸣. 比较矿物三氧化物凝聚体及山东蜂胶乙醇提取物对牙髓成纤维细胞生物学性能的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2019, 51(6): 1108-1114. |
| [5] | 郑苗,詹凌璐,刘志强,李和平,谭建国. 不同等离子体处理氧化锆对人牙龈成纤维细胞黏附能力的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2019, 51(2): 315-320. |
| [6] | 李乾，常亮，苏冬梅，马旭. 粉防己碱对心肌成纤维细胞增殖、活化的影响[J]. 北京大学学报(医学版), 2018, 50(2): 331-334. |
| [7] | 贾双双，李伟阳，刘欣，李丽英. 转化生长因子-β1 通过产生活性氧诱导骨髓间充质干细胞分化为肌成纤维细胞[J]. 北京大学学报(医学版), 2015, 47(5): 737-742. |
| [8] | 杨竣, 王涛, 张岩, 徐华, 王少刚, 刘继红, 叶章群. 碱性成纤维细胞生长因子在老龄大鼠血清及阴茎海绵体中的含量[J]. 北京大学学报(医学版), 2015, 47(4): 582-585. |
| [9] | 战园, 王晓颖, 李盛林, 傅歆, 俞光岩, 曹彤, 刘鹤. 两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究[J]. 北京大学学报（医学版）, 2012, 44(1): 1-5. |
| [10] | 刘畅, 宋振华, 秦泽莲. 人periostin干扰载体的构建及其对成纤维细胞目的基因表达的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2010, 42(5): 503-508. |
| [11] | 孙宇, 刘毅强, 冯国双, 李吉友. 转化生长因子β1在萎缩性胃炎发生中的作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(6): 635-639. |
| [12] | 万伟东, 杨顺露, 刘嘉茵, 崔毓桂, 周小平, 郭芳芳, 程宏宇, 程璐, 肖鹏峰, 陆祖宏. FGFR1，FGF10，FGF18单核苷酸多态性与非综合征性唇（腭）裂的相关性（英文稿）[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(4): 409-413. |
| [13] | 祁琨, 邓芙蓉, 郭新彪. 纳米二氧化钛颗粒对人肺成纤维细胞缝隙连接通讯的影响[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(3): 297-301. |
| [14] | 耿燕, 李涛, 胡晓青, 张晨光, 陈苹, 马康涛, 周春燕. 氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(3): 335-342. |
| [15] | 梅芳, 唐军民, 钟金妍, 齐伟宏, 唐岩, 李枫. 人羊膜基质细胞作为骨组织工程种子细胞的应用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(2): 192-195. |
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