北京大学学报(医学版) ›› 2012, Vol. 44 ›› Issue (6): 932-936.

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HBx诱导p16INK4a高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用

吕文平1,周开伦2,高彬1,陈永亮1△,向昕1,苏明1,董家鸿1   

  1. (1. 中国人民解放军总医院海南分院肝胆外科,三亚572013;2. 海南省人民医院肝胆外科, 海口571100)
  • 出版日期:2012-12-18 发布日期:2012-12-18

  • Online:2012-12-18 Published:2012-12-18

摘要: 目的:探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对p16INK4a表达和甲基化的影响,以及其在肝细胞癌早期发生中的作用机制。方法:采用脂质体法将真核表达载体pcDNA3.1B-HBx和pcDNA3.1B质粒分别稳定转染Chang细胞,构建表达HBx的细胞株Chang-HBx和不表达HBx的细胞株Chang-vector;半定量RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白质水平上检测Chang-HBx、Chang-vector和Chang细胞株中的p16INK4a表达;甲基化特异性PCR检测HBx对细胞中p16INK4a启动子甲基化的影响;CCK-8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线,流式细胞仪观察3种细胞的细胞周期和细胞凋亡率,重复3次。结果:成功构建了Chang-HBx和Chang-vector稳定细胞株,Chang-HBx细胞生长速度增快,Chang-HBx细胞的S期平均比率明显高于Chang-vector细胞和Chang细胞 (28.96% vs. 21.53%, P<0.001; 28.96% vs. 21.5%, P<0.001),而且Chang-HBx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于Chang-vector细胞和Chang细胞(2.71% vs. 3.69%, P<0.001; 2.71% vs. 3.36%, P<0.001)。初步机制研究证实HBx蛋白介导肝细胞的p16INK4a高甲基化,进而导致p16INK4a在mRNA和蛋白水平上表达均下降。结论:HBx通过诱导p16INK4a高甲基化下调后者的表达水平,可能在Chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用。

关键词: 癌, 肝细胞;乙型肝炎病毒X蛋白;基因, p16;甲基化

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