HBx诱导p16INK4a高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用

摘要/Abstract

摘要： 目的：探讨乙型肝炎病毒X（HBx）蛋白对p16^INK4a表达和甲基化的影响，以及其在肝细胞癌早期发生中的作用机制。方法：采用脂质体法将真核表达载体pcDNA3.1B-HBx和pcDNA3.1B质粒分别稳定转染Chang细胞，构建表达HBx的细胞株Chang-HBx和不表达HBx的细胞株Chang-vector；半定量RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白质水平上检测Chang-HBx、Chang-vector和Chang细胞株中的p16^INK4a表达；甲基化特异性PCR检测HBx对细胞中p16^INK4a启动子甲基化的影响；CCK-8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线，流式细胞仪观察3种细胞的细胞周期和细胞凋亡率，重复3次。结果：成功构建了Chang-HBx和Chang-vector稳定细胞株，Chang-HBx细胞生长速度增快，Chang-HBx细胞的S期平均比率明显高于Chang-vector细胞和Chang细胞 (28.96% vs. 21.53%, P<0.001; 28.96% vs. 21.5%, P<0.001)，而且Chang-HBx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于Chang-vector细胞和Chang细胞(2.71% vs. 3.69%, P<0.001; 2.71% vs. 3.36%, P<0.001)。初步机制研究证实HBx蛋白介导肝细胞的p16^INK4a高甲基化，进而导致p16^INK4a在mRNA和蛋白水平上表达均下降。结论：HBx通过诱导p16^INK4a高甲基化下调后者的表达水平，可能在Chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用。

吕文平, 周开伦, 高彬, 陈永亮, 向昕, 苏明, 董家鸿. HBx诱导p16^INK4a高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用[J]. 北京大学学报(医学版), 2012, 44(6): 932-936.

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