新型MGB探针特异性检测变形链球菌

摘要/Abstract

摘要： 目的：设计一种新型TaqMan^®MGB探针，利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌，提高PCR法检测变形链球菌的特异性，减少检测的假阳性。方法：提取 6种不同链球属细菌的DNA，分别进行巢式PCR和TaqMan^® MGB实时荧光定量PCR，比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性。巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物，第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物。TaqMan^® MGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同，设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配，不与其他细菌的基因序列匹配。将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16 μg/L 按5倍梯度稀释，制备出实时荧光定量PCR的标准曲线。结果：变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段，出现假阳性结果。TaqMan^® MGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株，不检出其他链球菌，比巢式PCR特异性更好。TaqMan^® MGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20 μg/L。结论：本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqMan^® MGB探针，建立利用TaqMan^®MGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法。

关键词: 寡核苷酸探针, 变形链球菌, 实时聚合酶链反应, RNA, 核糖体, 16S

郑晖，林久祥，杜宁，陈峰. 新型MGB探针特异性检测变形链球菌[J]. 北京大学学报（医学版）, 2013, 45(5): 782-786.

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