一种改进的大鼠皮层神经元原代培养方法及其性质鉴定

北京大学学报（医学版） ›› 2009, Vol. 41 ›› Issue (2): 212-216.

一种改进的大鼠皮层神经元原代培养方法及其性质鉴定

姜茜, 姜玉武△, 王静敏, 秦炯, 吴希如

(北京大学第一医院儿科, 北京100034)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-04-18 发布日期:2009-04-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-04-18 Published:2009-04-18

摘要/Abstract

摘要： 目的：对原有大鼠皮层神经元原代培养方法进行改进, 以获得数量更多、纯度更高、体外生长时间更长的神经细胞进行相关实验研究。方法: 使用3种不同成分的液体对培养器皿进行序贯预处理, 分离16~17 d胎龄的Wistar大鼠胎鼠皮层, 采用木瓜蛋白酶化学消化与机械吹打相结合的方法制备单细胞悬液, 经细胞计数后按照不同实验目的进行梯度密度接种。细胞接种当日4~6 h将含有血清的接种培养液换为添加B27的Neurobasal无血清培养基, 培养第3天(DIV3)用终浓度10 μmol/L的阿糖胞苷(cytosine arabinoside, Ara-C)处理24 h抑制胶质细胞增殖, 以后每周半量换液1次。用倒置相差显微镜观察细胞形态, 利用神经元特异性标志物微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2, MAP2)与细胞核双标记法鉴定培养神经细胞的纯度, 并以免疫荧光法检测突触前、后标记物以评估突触形成情况。结果: 与单纯多聚赖氨酸预处理培养器皿, 胰蛋白酶化学消化法分离细胞及含血清培养基培养的原方法相比, 方法改进以后收获的细胞产量明显增加, 且消化过程对细胞损伤小, 接种后细胞分散均匀, 杂质少, 纯度高, 树突、突触发育正常, 可长期存活。结论: 该方法简便可行, 结果稳定,用该方法培养的大鼠皮层神经元可作为神经元体外培养的良好实验模型。

关键词: 大脑皮质, 神经元, 细胞, 培养的, 木瓜蛋白酶, 免疫组织化学

姜茜, 姜玉武, 王静敏, 秦炯, 吴希如 . 一种改进的大鼠皮层神经元原代培养方法及其性质鉴定[J]. 北京大学学报（医学版）, 2009, 41(2): 212-216.

参考文献

相关文章 15

[1]	周泽臻,邓绍晖,颜野,张帆,郝一昌,葛力源,张洪宪,王国良,张树栋. 非转移性T_3a肾细胞癌患者3年肿瘤特异性生存期预测[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(4): 673-679.
[2]	李晋娜,许丽娜,李敏,宋怡,张静,贾龙斌. 急性脑梗死患者血清BDNF、IL-18、hs-CRP水平与血管性认知障碍的相关性[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(4): 708-714.
[3]	柴晓东,孙子文,李海爽,朱靓怡,刘小旦,刘延涛,裴斐,常青. 髓母细胞瘤分子亚型中CD8⁺T淋巴细胞浸润的临床病理特点[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(3): 512-518.
[4]	黄会娜,赵静,赵祥格,白自然,李霞,王冠. 乳酸对类风湿关节炎患者外周血CD4⁺T细胞亚群的调控作用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(3): 519-525.
[5]	张瑶,郭金鑫,战世佳,洪恩宇,杨慧,贾安娜,常艳,郭永丽,张璇. 富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(3): 495-504.
[6]	何珊,陈炘,程琦,朱灵江,张培玉,童淑婷,薛静,杜燕. 托法替布通过JAK/STAT3通路抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(3): 505-511.
[7]	蔡祥,王仁东,王世佳,任梓齐,于秋红,李冬果. 胶质母细胞瘤恶性进展中不同细胞亚群的动态轨迹和细胞通讯网络[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(2): 199-206.
[8]	简远志,王菲,尹宁,周若宇,王军波. 基于胚胎干细胞模型的Cry1Ab蛋白发育毒性[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(2): 213-222.
[9]	苏俊琪,王晓颖,孙志强. 舌鳞状细胞癌根治性切除术后患者预后预测列线图的构建与验证[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(1): 120-130.
[10]	潘媛,顾航,肖涵,赵笠君,汤祎熳,葛雯姝. 泛素特异性蛋白酶42调节人脂肪干细胞成骨向分化[J]. 北京大学学报（医学版）, 2024, 56(1): 9-16.
[11]	李建斌,吕梦娜,池强,彭一琳,刘鹏程,吴锐. 干燥综合征患者发生重症新型冠状病毒肺炎的早期预测[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(6): 1007-1012.
[12]	罗靓,李云,王红彦,相晓红,赵静,孙峰,张晓盈,贾汝琳,李春. 抗内皮细胞抗体检测在早期流产中的预测价值[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(6): 1039-1044.
[13]	陈楚云,孙蓬飞,赵静,贾佳,范芳芳,王春燕,李建平,姜一梦,霍勇,张岩. 北京社区人群促红细胞生成素相关因素及其与10年心血管疾病风险的关系[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(6): 1068-1073.
[14]	罗芷筠,吴佳佳,宋优,梅春丽,杜戎. 伴神经精神系统病变的系统性红斑狼疮相关巨噬细胞活化综合征2例[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(6): 1111-1117.
[15]	李辉,彭敏,武娇,张青霞,宁博涵,董颖. p16/Ki67细胞学双染在子宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的应用[J]. 北京大学学报（医学版）, 2023, 55(6): 1144-1148.

Metrics

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed