北京大学学报(医学版) ›› 2009, Vol. 41 ›› Issue (5): 516-520.

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PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体的构建及表达

李伟军, 邢晓芳, 曲立科, 孟麟, 寿成超   

  1. 北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-10-18 发布日期:2009-10-18

  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-10-18 Published:2009-10-18

摘要: 目的:分别构建肝再生磷酸酶-3 (phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)基因C104S位点突变和C端CAAX缺失的myc标签和GFP荧光标签重组质粒pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、pcDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)和pEGFP-PRL-3(△CAAX),并进行真核表达,为PRL-3的后续功能研究提供有效的工具。方法:设计PRL-3基因C104S点突变、C端CAAX缺失的特异性引物,以pcDNA3-myc-PRL-3质粒为模板,通过基因克隆、一步法点突变的方法构建各重组质粒,通过酶切和测序鉴定后转染真核细胞,检测其在细胞中的表达并观察定位情况。结果:成功构建了4种重组质粒,并能在结肠癌细胞LoVo中表达。用激光共聚焦扫描显微镜对细胞中绿色荧光融合蛋白的定位观察发现,当PRL-3的CAAX位点缺失后,PRL-3由内膜系统大量入核,与理论预期相符。结论:获得了PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体重组真核表达质粒并能在细胞中表达,为进一步研究PRL-3的功能提供了条件。

关键词: 蛋白质酪氨酸磷酸酶, 肿瘤, 点突变, 基因缺失

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