北京大学学报（医学版） ›› 2007, Vol. 39 ›› Issue (5): 484-488.
郭莹,王孝伟,徐扬,吕筱,王瑞平,刘俊义
摘要： 目的:建立检测逆转录酶活性的酶联免疫吸附实验方法,用于筛选人类免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶抑制剂.方法:利用DNA的固相固定技术将引物固定于96孔微量滴定板上,以poly(rA)· Oligo(dT)15为模板,在逆转录酶的作用下,将生物素标记的dUTP掺入,用碱性磷酯酶反应系统检测酶活性.结果: 建立了检测逆转录酶活性的酶联免疫(ELISA)法,并用ELISA法验证了已知阳性药物对逆转录酶的抑制作用,对ELISA法在动力学研究的应用做了初步探讨,评估ELISA法的重复性、稳定性、特异性和敏感性.结论: ELISA 法检测HIV-1 逆转录酶活性具有简单、快速、特异性强、重复性好、污染小等特点,适用于以HIV-1 逆转录酶为靶点的抑制剂的筛选及相关机制的研究.
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