目的:检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体CXCR4 mRNA和蛋白在子宫内膜癌细胞系及组织中的表达.方法:应用免疫组织化学和RT-PCR技术,检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞,44例子宫内膜癌组织,26例非典型增生子宫内膜、单纯增生子宫内膜和正常子宫内膜组织中SDF-1和CXCR4 mRNA和蛋白表达水平.结果:HEC-1A和Ishikawa细胞均表达CXCR4 mRNA;Ishikawa细胞中SDF-1 mRNA弱表达,而HEC-1A细胞中SDF-1 mRNA未见表达.CXCR4和SDF-1在正常和良性病变的子宫内膜组织腺体细胞中的阳性表达率为100%,在子宫内膜癌组织的腺体细胞中的阳性表达率分别为90.9%和93.2%.各种子宫内膜组织中间质细胞CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于腺体细胞.在子宫内膜癌腺体细胞和间质细胞中CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于正常及良性病变者.在低分化的子宫内膜癌腺体细胞中CXCR4和SDF-1的表达弱于高分化者.结论:CXCR4和SDF-1在子宫内膜癌细胞系、子宫内膜组织及内膜癌组织中的表达存在差异,在内膜癌组织中其表达均显著弱于正常及良性病变者.

目的:探讨孤儿核受体-雌激素受体相关受体(ERR)α及雌激素受体(ER)α在子宫内膜癌发生、发展中的作用以及临床应用价值.方法:采用免疫组化法检测35例子宫内膜腺癌组织中ERα和ERRα的表达,评估其与临床病理参数之间的关系.结果:Ⅰ期子宫内膜癌组织中ERα的阳性表达率明显高于Ⅱ～Ⅳ期者(P＝0.005);而ERRα的阳性表达率明显低于Ⅱ～Ⅳ期者(P＝0.007).ERα (+)和ERRα (-)组中Ⅰ期子宫内膜癌的比例、G1～2级者及肌层浸润深度＜1/2者的数目均明显高于ERα (-)ERRα (+)组(P＝0.000,P=0.031和P=0.022).结论:ERα可作为子宫内膜癌预后良好的指标,而ERRα可能是子宫内膜癌预后不良的指标,二者联合监测有可能提高临床预测价值.

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对细胞膜雌激素受体α(mERα)调控的时效和量效关系.方法:以10^-6 mol/L 17β-E2分别作用于Ishikawa细胞0 min,3 min,10 min,30 min,2 h,12 h和48 h,以10^-12 mol/L,10^-10 mol/L,10^-8 mol/L和10^-6 mol/L 17β-E2分别作用Ishikawa细胞30 min,对各组细胞均进行免疫荧光染色,以流式细胞仪分别测定细胞膜荧光染色阳性率及平均荧光强度.结果:给予17β-E2后随时间延长mERα的荧光强度逐渐增加(P＜0.05),于给药后30 min达到最高值,给药2 h后逐渐下降;在低浓度17β-E2作用下(尤其是10^-10 mol/L),mERα的表达量较高,随着17β-E2浓度的升高,mERα的表达量反而下降.结论:mERα在17β-E2作用30 min时表达最强,其后逐渐减弱;mERα在生理浓度的17β-E2作用下表达最强.

目的:探讨雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex)对17β-雌二醇(E2)作用下ER阳性的Ishikawa细胞和ER低表达的HEC-1A子宫内膜癌细胞系细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨ICI182780治疗子宫内膜癌的可行性.方法:应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞技术观察ICI182780对E2作用下的子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌细胞在570 nm处的光密度值增大,Ishikawa细胞G0～G1期的比例减少,S期的比例增多,HEC-1A细胞各期的比例变化不显著.随着ICI182780的浓度增加,ICI182780可以使E2作用下Ishikawa细胞的光密度值逐渐下降至基础状态水平,并且使其发生细胞凋亡,表现为早期凋亡细胞增多,使细胞G0～G1期的比例升高,S期的比例下降;HEC-1A细胞的上述变化不显著.结论:ICI182780可以抑制E2对Ishikawa细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,同时也使细胞周期停滞在G1期;ICI182780对HEC-1A细胞的增殖、凋亡和细胞周期无明显影响.ICI182780有可能用于ER阳性子宫内膜癌的治疗.

目的:通过反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)技术特异性下调子宫内膜癌细胞系中孕激素受体亚型B(progestrone receptor isoform B, PR-B),在此基础上观察激素对转染前后细胞作用的改变,了解子宫内膜癌细胞中孕激素受体亚型功能的不同.方法:体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa和中分化子宫内膜癌细胞Hec-1B, 转染PR-B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸及错义寡核苷酸后,提取细胞蛋白,采用Western blot 方法测定各个条件下内膜癌细胞中两种孕激素受体亚型的表达;并在转染PR-B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸及错义寡核苷酸后,用MTT法测定转染前后各种激素对细胞生长作用的改变.结果:转染孕激素受体亚型PR-B的反义寡核苷酸后, 两种细胞系PR-B的表达较非转染组显著下调,孕激素受体亚型A(progesterone receptor isoform A,PR-A)的表达无明显变化.雌激素(17β-estradiol,E2)作用后72 h Ishikawa细胞生长显著高于对照组,Hec-1B细胞较对照组有升高趋势,但差异无统计学意义.孕激素(R5020)作用72 h后对Ishikawa细胞有显著抑制作用,96 h后对Hec-1B细胞有显著抑制作用.在雌、孕激素作用基础上加入米非司酮(mifepristone,RU486),96 h后Ishikawa细胞明显增生,而仅48 h后HEC-1B细胞明显增生.转染PR-B的反义寡核苷酸后,雌激素对内膜癌细胞生长的刺激作用较转染前增强 ,孕激素对细胞的生长抑制作用减弱甚至消失,米非司酮拮抗孕激素的作用较转染前显著降低. 结论:(1)向子宫内膜癌细胞系中转染PR-B的反义寡核苷酸可以下调PR-B的表达,使细胞优势表达PR-A;(2)雌激素可以刺激内膜癌细胞的生长,PR-B可能参与下调雌激素对内膜癌细胞的促生长作用;(3)孕激素在雌激素基础上抑制内膜癌细胞的生长,主要可能通过PR-B起抗内膜癌细胞增生作用;(4)米非司酮有拮抗孕激素抑制子宫内膜癌细胞生长的作用.PR-B可能参与介导了米非司酮拮抗孕激素的作用.

目的:探讨高危型人乳头瘤状病毒(human papillomavirus , HPV)检测对宫颈液基细胞学诊断为不能明确意义的不典型鳞状细胞(atypical squamous cells undetermined significance, ASC-US)和低度鳞状上皮内病变(low squamous intraepithelial lesion , LSIL)的分流管理作用.方法:对940例宫颈液基细胞学检查结果为ASC-US或LSIL的患者采用二代杂交捕获(hybird capture Ⅱ, HC-Ⅱ)方法检测高危型HPV DNA,并在阴道镜指导下进行宫颈活检.结果:940例中,ASC-US 497例,LSIL 443例.行宫颈活检病理诊断,慢性宫颈炎417例,宫颈湿疣315例,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial lesions, CIN)1级124例,CIN2 级65例,CIN3级或宫颈浸润癌19例.在宫颈细胞学异常的ASC-US和LSIL组中,高危型HPV阳性率分别是59.6%和84.9%.在ASC-US和LSIL组HPV阴性时CIN2级及其以上病变(CIN2级,CIN3级或宫颈浸润癌)检出率为0.5%和6.0%,HPV阳性时检出率是8.8%和14.1%,HPV阳性时CIN2级及其以上病变检出率高于HPV阴性患者,差异具有统计学意义.在ASC-US组中,高危型HPV检测对CIN2级及其以上病变的阴性预测值达99.5%;当高危型HPV DNA检测结果在1～9.99时,CIN2级及其以上病变仅占1.6%;在10以上时,CIN2级及其以上病变占10.7%.结论:宫颈细胞学为ASC-US的患者如果高危型HPV阳性,检出CIN2级及其以上病变的概率增加,并且高危型HPV检测的阴性预测值高,在ASC-US患者中,随着HPV载量增高,检出CIN2级及其以上病变的概率随之增高.高危型HPV检测和病毒载量有助于ASC-US的分流管理,而对LSIL无分流管理作用.

目的:探讨紫杉醇纳米粒(PLA)腹腔给药对大鼠卵巢癌的治疗效果及作用机制,并研究PLA在大鼠体内的分布.方法:用超声乳化法合成PLA.制备大鼠腹腔种植性卵巢癌模型,将40只荷瘤鼠随机分为4组,PLA组及市售紫杉醇(PTX)组各15只,生理盐水及PLA空白支架组各5只.每周腹腔给药5 mg/kg,共5次.末次给药后处死大鼠,比较荷瘤量及腹水量,用免疫组化法检测肿瘤组织增殖与凋亡.以高压液相色谱(HPLC)方法检测大鼠血浆及肝、心、肿瘤组织及盆腔淋巴结中的药物浓度.结果:合成的PLA包封率达70%,粒径分布为185～385 nm.PLA组大鼠荷瘤量及腹水量分别为(4.55±0.11) g及(3.55±0.50) mL,显著低于PTX组(10.13±0.52) g 及(30.45±1.55) mL,P＜0.01.免疫组化检测PLA组TUNEL阳性细胞数为(105±15),PCNA 阳性细胞数为(20±5),与PTX组[分别为(55±10)及(85±10)]相比,差异有统计学意义(P＜0.01).HPLC结果显示,末次给药后48 h PLA组肿瘤及盆腔淋巴结紫杉醇的药物含量分别为(1.53±0.35) μg/g及(0.75±0.05) μg/g,明显高于PTX组[(0.0636±0.015) μg/g及(0.188±0.045) μg/g, P＜0.01].结论:PLA腹腔给药可显著抑制大鼠卵巢癌生长,并具有淋巴靶向性.

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的变化与血脂代谢的关系.方法:应用ELISA方法检测65例PCOS患者及20例体重指数(BMI)＜25 kg/m2的正常对照组血清中MCP-1水平,用化学发光法检测血清中泌乳素(PRL)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)和睾酮(T)水平,用放射免疫法检测血清中雄烯二酮(A)水平;同时检测血脂:甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白(a)[LP(a)].根据BMI将PCOS患者分为:肥胖组27例(BMI≥25 kg/m2),非肥胖组38例(BMI＜25 kg/m²).结果:PCOS组MCP-1(P=0.001)及ApoB(P=0.018)水平明显高于正常对照组,而ApoA/ApoB的比值明显低于正常对照组(P=0.015).肥胖PCOS患者血清MCP-1水平明显高于非肥胖PCOS患者(P =0.012),非肥胖PCOS患者MCP-1水平明显高于正常对照组(P=0.03).单因素相关分析显示,MCP-1与BMI(r=0.366,P=0.001),LH(r=0.262, P=0.016),TG(r=0.480,P=0.000)及ApoB(r=0.289,P=0.008)呈正相关,与ApoA/ ApoB的比值呈负相关(r＝-0.282,P=0.009);控制BMI的偏相关分析显示,MCP-1与LH(r=0.2577,P=0.020)及TG(r=0.4611, P=0.000)呈正相关.多元回归分析显示TG和BMI是影响MCP-1的主要因素,而且TG的影响更大.结论:肥胖与非肥胖PCOS患者血清MCP-1水平均明显升高;MCP-1的升高与BMI,LH,TG,ApoB及ApoA/ApoB的比值有关;TG和BMI是影响PCOS患者血清MCP-1改变的主要因素,而且TG的影响更大;MCP-1可能参与了PCOS的病理生理过程以及PCOS患者远期并发症的发生.

目的:探讨共患和不共患破坏性行为障碍(DBD)的儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)与5-HT1D受体基因(HTR1D)1350T>C和1236A>G两种多态之间的关联.方法:检测90个共患DBD的ADHD核心家系和182个不共患DBD的ADHD核心家系的1350T>C和1236A>G两种多态,并分别进行传递不平衡(TDT)检验和单体型分析.结果: 在共患DBD的家系中,1350T等位基因(χ2＝3.67,P=0.055)和G/T单体型(χ2＝3.84,P=0.050)优先传递,1350C等位基因(χ2＝3.67,P=0.055)和G/C单体型(χ2＝5.22,P=0.022)传递减少.在不共患DBD的家系中未发现任何等位基因和单体型的传递不平衡现象.结论: ADHD共患DBD与否在HTR1D受体基因多态水平存在遗传差别,遗传在共患DBD的ADHD中具有更重要的作用.

目的:观察油酸(OA)致大鼠急性肺损伤(ALI)模型中,血管活性肽中介素(Intermedin,IMD)及其受体系统--降钙素受体样受体(CL)与受体活性修饰蛋白(RAMPs) 在肺组织中含量的变化及其病理意义.方法:尾静脉注射OA(0.2 mL/kg)制备大鼠ALI模型为OA组,测定大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数及中性粒细胞百分比(%PMN);放射免疫法测定血浆和肺组织匀浆IMD1-53含量; 半定量RT-PCR方法测定肺组织IMD,CL 和RAMP1,-2,-3 mRNA水平; 受体放射配体结合实验检测肺浆膜125I-IMD1-53受体结合力.结果:与正常对照组比较,油酸组大鼠血浆及肺组织匀浆中IMD1-53含量分别下降20.8%和74.5%(均P＜0.05);肺组织IMD,CL,RAMP1,RAMP2的mRNA表达水平分别下降30%,38%,26%和37.9%(均P＜0.01),肺组织中IMD与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性.125I- IMD1-53受体最大结合位点增加.肺组织、血浆中IMD浓度与PaO2呈正相关,与BALF中%PMN呈负相关(P＜0.01或0.05).结论:油酸致急性肺损伤大鼠肺组织IMD1-53含量降低,IMD,CL 和RAMP1,-2,-3基因表达有不同程度的降低,提示IMD及其受体系统参与了OA致急性肺损伤的发病过程.

目的:分析软组织间叶性软骨肉瘤的临床病理学和免疫组织化学特点.探讨其诊断、鉴别诊断依据和预后.方法:复习北京积水潭医院1995至2005年确诊的2例软组织间叶性软骨肉瘤的病理学及临床特点,应用免疫组织化学二步法检测肿瘤细胞对白细胞共同抗原(leukocyte common antigen,LCA),CD3,CD20,CD45RO,CD79a,CD99,神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE),S-100,突触素(synatpophysin,Syn),嗜铬素(chromogranin A,CgA),CK7,CK19,上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA),二型胶原(collagen type Ⅱ,Coll-Ⅱ),肌动蛋白(sarcomeric-actin),结蛋白(desmin),Ki-67,P53的表达,并进行随访.结果:2例软组织间叶性软骨肉瘤均发生于下肢横纹肌组织内.其主要影像学特点为肿瘤内钙化和肿瘤边缘硬化;病理组织学表现为未分化小细胞与肿瘤性软骨岛并存,小细胞区均见血管外皮瘤样结构.CD99,NSE,CgA和Syn在肿瘤小细胞呈阳性表达;S-100在软骨细胞呈阳性表达;Coll-Ⅱ在软骨基质呈阳性表达;Ki-67,P53在51%-75%的肿瘤细胞核呈阳性表达;LCA,CD3,CD20,CD45RO,CD79a,Sarcomeric-Actin,Desmin,CK7,CK19和EMA阴性. Ki-67的表达程度可能和预后有关.结论:软组织间叶性软骨肉瘤是小细胞原始间叶组织向幼稚软骨组织的分化,主要病理学特征是未分化小细胞与肿瘤性软骨并存的双态性结构和小细胞区形成血管外皮瘤样结构.此肿瘤预后差.

目的:探讨体外培养人胚肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblasts-1,HPF-1)在外源性转化生长因子β1(transforming growth factor beta, TGF-β1)作用下结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)与低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor related proteins, LRP) 的表达变化及意义.方法:将HPF-1用5 μg/L的TGF-β1分别作用0, 3, 6, 12和 24 h.用RT-PCR方法检测CTGF及LRP mRNA的表达;用蛋白免疫印迹检测LRP蛋白表达变化;用免疫沉淀方法检测TGF-β1作用不同时间,与LRP结合的CTGF的数量变化;用细胞免疫荧光检测细胞中LRP表达情况.结果:相关分析显示,以3 h为关键点,CTGF mRNA(131.53±2.86)与LRP mRNA(224.87±7.00)表达变化具有正相关性(r=0.840 2,P＜0.05);LRP蛋白随TGF-β1作用时间不同,表达水平先升高,于3 h达高峰,而后逐渐下降,用免疫印迹法分析,相对于0 h组(190.85±2.86),3 h组(222.45±3.66)表达具有统计学意义(F=18.06,P＜0.05);用免疫荧光标记细胞LRP也得到类似的结果,比较0 h组(27.56±6.72)和3 h组(88.66±15.72)LRP蛋白表达(F=244.36,P＜0.01)差异具有统计学意义.结论:LRP作为CTGF的受体蛋白,在TGF-β1作用不同时间的情况下,表达量发生变化,并与CTGF的表达成正相关,提示其在肺间质纤维发生中发挥作用.

目的:比较两种不同的麻醉和镇痛方法对老年患者非心脏手术后早期认知功能的影响.方法:103例拟行择期开腹手术的老年患者,随机接受全身麻醉继以术后静脉镇痛(全身麻醉组,53例)或全身-硬膜外复合麻醉继以术后硬膜外镇痛(全身-硬膜外复合麻醉组,50例).分别在术前1日和术后第7天对患者进行神经精神功能9项测验,各测验项目术后值功能降低等于或超过术前值的20%判定该项目出现术后功能恶化;一个患者术后有2个或2个以上的测验项目出现功能恶化判定该患者发生了术后认知功能障碍.结果:92例患者完成了手术前后神经精神功能测验.术后第7天认知功能障碍发生率全身麻醉组为44.4%(20/45例),全身-硬膜外复合麻醉组为48.9%(23/47例),两组间差异无统计学意义.Logistic回归分析显示受教育年限短和普通外科手术是发生术后早期认知功能障碍的独立危险因素.结论:老年患者在腹部手术后早期有46.7%的患者发生了认知功能障碍,但不同的麻醉和术后镇痛方法对术后认知功能障碍发生情况的影响差异无统计学意义.受教育年限短和普通外科手术是术后早期认知功能障碍的危险因素.

目的:比较西罗莫司口服给药(商品名:雷帕鸣)和局部缓释给药两种不同方式对静脉移植血管内膜增生的影响,探讨其优缺点.方法:健康家兔24 只,建立颈外静脉-颈总动脉移植模型,随机分为4组:空白对照组、Pluronic F-127 对照组、局部缓释西罗莫司组和口服西罗莫司组.观察静脉移植血管内膜增生厚度及管腔狭窄程度,内膜及中层平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达程度及细胞凋亡水平.结果:与空白对照组相比,局部缓释西罗莫司组和口服西罗莫司组血管内膜增生受到明显抑制[内膜厚度分别为(90.11±10.99) μm, (29.38±10.45) μm和(18.29±9.03)μm],管腔再狭窄程度减轻(管腔面积/总面积分别为0. 58±0.11, 0.80±0.16 ,0.77±0.16),平滑肌细胞增殖受到抑制(细胞增殖指数分别为31.03%±6.80%, 20.32%±9.19%和16.22%±5.85%),细胞凋亡水平增加(调亡指数分别为16.27%±6.49%, 33.39%±7.05%和33.42%±7.11%),局部缓释西罗莫司组与口服西罗莫司组差异无统计学意义.结论:局部缓释西罗莫司与口服西罗莫司均可以有效抑制静脉移植血管内膜增生.局部缓释给药方式由于对全身影响小而推荐作为首选给药方式.以上研究结果为临床应用提供了实验依据.

目的:对63例鼻部皮肤外科手术病例进行回顾性研究,探讨鼻部皮肤外科手术病例的共性、特点.方法:应用SPSS 10.0和SAS 6.12统计软件进行分析.结果:患者平均年龄(46.92±18.63)岁,男女性别构成比相近.患基底细胞癌的病例最多(42.9%),色素痣其次(38.1%),其余均为良性肿物.手术部位中鼻翼占52.4%,鼻梁占22.2%,鼻尖占15.9%,其余部位占9.5%.所有病例中,应用单纯闭合手术者占69.8%,应用到复杂成形技术的占30.2%.统计结果显示,单纯闭合与复杂成形修复在手术部位上的分布差异具有统计学意义,两者所对应的切口面积差异有统计学意义;皮肤恶性肿瘤与良性肿物在是否应用了复杂成形技术方面的差异有统计学意义.结论: 对于发生于鼻部的皮肤恶性肿瘤及常见良性肿物除应用经典皮肤外科手段--Mohs显微外科手术完整切除肿瘤(或肿物)以外,熟练应用鼻部成形修复技术也非常重要.

目的:研究纳米载银基托树脂的生物相容性,为纳米载银基托树脂的临床应用提供生物学依据.方法:根据中华人民共和国医药行业标准,用分子滤过法检测纳米载银抗菌剂--载银磷酸复盐STR-1质量分数分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂的细胞毒性,并测定含两种不同质量分数抗菌剂STR-1的基托树脂与抗菌剂粉体STR-1的溶血率.结果:不含抗菌剂的对照组基托树脂、抗菌剂质量分数分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂对小鼠成纤维细胞L929无毒性作用,细胞培养第2小时及第24小时,对照组和实验组滤膜染色均匀,呈蓝色,染色密度无变化,褪色面积为0 mm²,毒性分级均为0级.抗菌剂粉体STR-1、含5 g/L和10 g/L抗菌剂的载银基托树脂溶血率分别为1.7%,3.5%和3.7%,溶血率均小于国家医药行业标准规定的5%,为无溶血作用.结论:抗菌剂STR-1含量分别为5 g/L和10 g/L的纳米载银基托树脂具有较好的生物相容性,具备了临床应用的前提.

目的:摸清高校社区(不同于固定居民,社区流动人口较大)的生活方式疾病的基本情况及相关的行为因素,了解社区相关背景材料与社会支持系统,分析社区卫生服务的实际需求,确定优先解决的健康问题,为社区生活方式疾病的综合防治提供依据.方法:查阅医院、家属委员会、派出所、学生管理科等单位的有关资料.采用分层随机抽样,对社区居民生活方式疾病及相关危险因素进行问卷调查,并对学生和社区群众、职工进行深入访谈.结果:获得了北京大学医学部社会人口学诊断、流行病学诊断、行为与环境诊断、教育与组织诊断.结论:北京大学医学部社区的健康问题存在不良生活方式及一些行为危险因素,提示社区居民需要专业卫生服务,全人群中需要进行生活方式疾病的综合管理.

目的:以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列.方法:首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白(RFP)的融合基因表达质粒,然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA(siRNA, small interference RNA)共转染HEK293T细胞,构成外源基因系统,以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选.然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞,以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况,通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性.结果:针对大鼠Mecp2基因mRNA 918～936位核苷酸的siRNA(序列:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列.此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子,推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达.且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区,推测可同时抑制1.9 kb和10 kb的大鼠Mecp2基因mRNA的表达.结论:本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础.

目的:探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜细胞中白三烯B4(LTB4)诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达的定量测定方法.方法:RA患者的滑膜细胞进行原代培养,加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下,分别加入MK-886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)和苯丁抑制素(Bestatin,LTA4水解酶抑制剂),采用TaqMan PCR来定量检测滑膜细胞中TNF-α和IL-1β mRNA水平的表达.结果:原代培养的RA滑膜细胞的基本TNF-α和IL-1β mRNA表达水平(TNF-α/GAPDH和IL-1β/GAPDH),分别为0.02±0.00和0.16±0.01.当加入外源性的LTB4 10^-9和10^-8 mol/L后,LTB4 10^-9 mol/L使TNF-α RNA水平的表达增高了7倍,LTB4 10^-8 mol/L使TNF-α mRNA水平的表达增高了15倍,LTB4 10^-8 mol/L使IL-1β mRNA水平增高了1倍.而加入LIT刺激内源性的LTB4增高后,使TNF-α和IL-1β mRNA水平分别增高了145倍和12倍.在LIT存在的情况下,加入LTB4合成抑制剂MK-886(1 μmol/L,10 μmol/L)后,使TNF-α mRNA水平的表达分别下降15%和66%,IL-1βm RNA水平的表达分别下降了41%和71% . 1100 mg/L 苯丁抑制剂使TNF-α和IL-1β mRNA水平表达分别降低了86%和79%.结论:RA滑膜细胞中LTB4可诱导TNF-α和IL-1β mRNA水平的表达,并有助于定量测定mRNA表达水平.