大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选

北京大学学报（医学版） ›› 2006, Vol. 38 ›› Issue (5): 529-532.

大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选

张玉稚,王汉森,潘虹,李美蓉,包新华,金靖,吴希如

(北京大学第一医院儿科,北京 100034)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-10-18 发布日期:2006-10-18

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-10-18 Published:2006-10-18

摘要/Abstract

摘要： 目的:以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列.方法:首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白(RFP)的融合基因表达质粒,然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA(siRNA, small interference RNA)共转染HEK293T细胞,构成外源基因系统,以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选.然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞,以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况,通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性.结果:针对大鼠Mecp2基因mRNA 918～936位核苷酸的siRNA(序列:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列.此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子,推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达.且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区,推测可同时抑制1.9 kb和10 kb的大鼠Mecp2基因mRNA的表达.结论:本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础.

关键词: DNA结合蛋白质类, DNA甲基化, RNA, 小分子干扰

张玉稚, 王汉森, 潘虹, 李美蓉, 包新华, 金靖, 吴希如. 大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选[J]. 北京大学学报（医学版）, 2006, 38(5): 529-532.

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